सद्याचो†सद्याचो पत्तो: OX11 0DE, UK, डायमंड बिल्डिंग, हार्वेल सायन्स आनी इनोव्हेशन पार्क, डायटकोट, ऑक्सफर्डशायर, युके, डायमंड लायट सोर्स कंपनी लिमिटेड, इलॅक्ट्रॉनीक बायोलॉजिकल इमेजिंग सेंटर.
विक्रिया केंद्र उजवाड-कापणी संकुल १ (RC-LH1) हो जांबळ्या प्रकाशसंशोधन बॅक्टेरियाचो मुखेल प्रकाशसंश्लेशण घटक. आमी ऱ्होडोप्स्युडोमोनास पॅलुस्ट्रिसांतल्यान आरसी-एलएच1 संकुलाचीं दोन क्रायो-इलॅक्ट्रॉन सूक्ष्मदर्शक संरचनां वळख करून दिलीं. आरसी-एलएच११४-डब्ल्यू संकुलाची २.६५-Å रिझोल्यूशन संरचनेंत आरसी भोंवतणी १४ उपखंड एलएच१ वळीं आसतात, जीं प्रथिन डब्ल्यू हांकां लागून खंडीत जातात, जाल्यार प्रथिन-डब्ल्यू नाशिल्लो संयुग पुरायपणान आरसी भोंवतणी आरसी संरचना आसता. बंद 16 उपखंड एलएच1 लूप. ह्या संरचनेची तुळा केल्यार आरसी-एलएच१ संकुलांतल्या क्विनोनाच्या गतीविज्ञानाची म्हायती मेळटा, तातूंत आरसी क्यूबी सुवातेर क्विनोनाक बांदतना पयलीं अनिर्धारीत संरचनेचे बदल तशेंच सहाय्यक क्विनोन बंधनस्थानांचें स्थान, जे तांकां आरसीक पास करपाक मदत करतात. डब्ल्यू प्रथिनाची खाशेली रचणूक एलएच१ वळ बंद जावंक दिना, ताका लागून क्विनोन/क्विनोलोन विनिमयाक गती दिवपाखातीर एक वाहिनी तयार जाता.
प्रकाशसंश्लेशणावरवीं मेळपी उर्जा धर्तरेचेर चड करून सगळें जिवीत तिगोवन दवरूंक शकता आनी तातूंत सौर जैवतंत्रज्ञानाची व्हड संभाव्यताय आसा. जागतीक प्रकाशसंश्लेशणाक चालना दितना जांबळ्या प्रकाशसंशोधक बॅक्टेरियांत वेगवेगळे ऊर्जा पद्दती आनी चयापचयाची तांकय दिसून येतात. प्रकाशसंश्लेशण टाळून काळखांत विषमजीवी बॅक्टेरिया म्हणून वाडूंक शकतात, नायट्रोजन आनी कार्बन डाय-ऑक्सायड स्थिर करपाक शकतात, हायड्रोजन तयार करपाक शकतात आनी सुगंधी संयुगांचें विघटन करपाक शकतात (1-3). ह्या प्रक्रियांखातीर उर्जा मेळोवपाखातीर उजवाडाचें रसायनीक उर्जेंत बेगीन आनी कार्यक्षमतेन रुपांतर करचें पडटा. उजवाड सापडपी एंटीना संकुल उजवाड शोशून घेता आनी आडखळिल्ली ऊर्जा विक्रिया केंद्रांत (RC) हस्तांतरीत करता तेन्ना ही प्रक्रिया सुरू जाता, जाका लागून आघात वेगळेपण सुरू जाता (4 – 7). जांबळ्या प्रकाशसंग्रहक बॅक्टेरियांतल्या प्रकाशसंश्लेशणाचो मुळावो एकक प्रकार 2 आरसीचो आसून ताचे भोंवतणी उजवाड-कापणी संकुल १ (LH1) आसता आनी ताका लागून आरसी-एलएच१ कोर संकुल तयार जाता. LH1 हें वक्र αβ विषमयुग्मांच्या सरणींतल्यान तयार जाता, तातूंतले दरेक दोन बॅक्टेरियाचे क्लोरोफिल (BChl) a रेणू आनी एक वा दोन कॅरोटीनॉयड (8-12) बांदतात. सगळ्यांत सोप्या LH1 एंटीनांत बंद वळीन आरसी (9-13) भोंवतणीं आशिल्ले 16 वा 17 αβ विषमयुग्म आसतात, पूण हेर कोर संयुगांत पड्ड्याभायर पॅप्टायड भोंवतणच्या LH1 च्या सातत्याक खंडीत करतात, ताका लागून आरसी आनी सायटोक्रोम bc1 संकुल हांचेमदल्या क्विनोल/क्विनोन प्रसाराक चालना मेळटा (11, १३-१५) अशें म्हण्टात. जांबळो प्रकाशसंशोधक वनस्पत ऱ्होडोप्स्युडोमोनास (Rps.) हो एक आदर्श जीव प्रकाशसंश्लेशणाक आदार दिवपी ऊर्जा आनी इलॅक्ट्रॉन हस्तांतरण समजूंक शकता. आरपीएस ची पयली स्फटिक संरचना. पॅलुस्ट्रिस आरसी-एलएच१ संकुलाचे मॉडेल आरसी आसून ताचे भोंवतणी १५ हेट्रोडायमेरिक एलएच१ वळीं आसतात आनी तांकां “प्रथिन डब्ल्यू” नांवाच्या अज्ञात प्रथिनान खंडीत करतात (१४). उपरांत प्रथिन-डब्ल्यू हें आरपीए४४०२ अशें वळखून घेतलें, हें एक लक्षणीय १०.५ केडीए प्रथिन आसून तातूंत तीन अदमास केल्ले ट्रान्समेम्ब्रेन हेलिसीस (टीएमएच) आसतात (१६). RC-L, M (pufL, pufM) आनी LH1α, β (pufA, pufB) उपखंडांक संकेत करपी जंतूखातीर वापरिल्ल्या नांवपद्दतीकडेन जुळोवपाखातीर आमी प्रथिन W संकेत करपी rpa4402 जनुकाचे नांव pufW अशें बदलपाचो प्रस्ताव मांडटात. मजेची गजाल म्हळ्यार प्रथिन-डब्ल्यू फकत आरसी-एलएच१ च्या सुमार १०% भागांत आसता आनी ताका लागून आरपीएस. palustris हातूंत दोन वेगवेगळे आरसी-एलएच१ संयुग तयार जातात. हांगा आमी दोन कोर संयुगांची उच्च रिझोल्यूशन क्रायो-ईएम (क्राय-ईएम) संरचनेचो अहवाल दितात, तातूंतल्या एका संयुगांत प्रथिन डब्ल्यू आनी 14 αβ हेटरोडायमर, दुसरें प्रथिन डब्ल्यू आनी बंद 16 हेटरोडायमर एलएच1 लूप. आमची रचणूक आरपीएसच्या आरसी-एलएच1 संकुलाच्या समजुतींतल्या पांवड्याच्या बदलाचें प्रतिनिधित्व करता. palustris, कारण आमी दर एका प्रकाराच्या एकजीव लोकसंख्येचें विश्लेशण केलां आनी दरेक पॅप्टायड आनी बंधीत रंगद्रव्य आनी संबंदीत लिपिड आनी क्विनोन स्पश्टपणान नेमपाक फावो तो रिझोल्यूशन आसा. ह्या संरचनेची तुळा केल्यार आतां मेरेन हेर खंयच्याच आरसी-एलएच१ संकुलांत मेळूंक नाशिल्लीं तीन टीएमएच प्रथिनां-डब्ल्यू क्विनोन/क्विनोलोन विनिमयाक गती दिवपाखातीर क्विनोन वाहिनी तयार करतात अशें दिसून येता. संरक्षित लिपिड आनी क्विनोन हांचीं जायतीं बंधनस्थानां वळखून घेतल्यांत आनी क्विनोन आनी आरसी हांच्या संयोगा उपरांत आमी नवो संरचनेंत बदल उक्तो केला, जो ऑक्सिजनयुक्त प्रकाशसंवर्धक जीवांच्या प्रकाशप्रणाली II (PSII) आरसी खातीर योग्य आसूं येता. आमच्या सोदांतल्यान जांबळ्या प्रकाशभक्षक बॅक्टेरियाच्या आरसी-एलएच1 कोर संकुलांतल्या क्विनोन/क्विनोलोन बंधन आनी विनिमय हांच्या गतिकीविशीं नवी म्हायती मेळटा.
आरपीएसांत मेळपी दोन संयुगांचो सविस्तर अभ्यास करपाक सोंपें जावचें म्हणून. palustris, आमी जैव रसायनीक पद्दतीन दरेक आरसी-एलएच1 वेगळो करतात. प्रथिन डब्ल्यू-उणाव आशिल्लो संयुग (हाचे फुडें ΔpufW अशें म्हण्टात) pufW जीन नाशिल्ल्या जातींतल्यान शुध्द केलें (16) आनी फकत एक RC-LH1 संयुग तयार करूं येता. प्रथिन डब्ल्यू आशिल्लें संयुग एका जातीन तयार जाता. ह्या जातीच्या W प्रथिनांत ताच्या C-अंतराचेर 10x His टॅगान बदल करतात, जाका लागून प्रथिन W आशिल्लो संकुल चडशा उणाव आशिल्ल्या प्रथिन W कडेन धातूक स्थिर करून प्रभावीपणान जोडूंक मेळटा. संकुल प्रभावीपणान वेगळें करतात (16) अॅफिनिटी क्रोमॅटोग्राफी (IMAC).
आकृती १ त दाखयल्लेप्रमाण दोनूय संयुगांत तीन उप-एकक आरसी (आरसी-एल, आरसी-एम आनी आरसी-एच) आसून ताचे भोंवतणी एलएच१ एंटीना आसता. प्रथिन-डब्ल्यू नाशिल्ल्या संकुलाची २.८०-ए संरचनेंत १६ αβ विषमयुग्मज दिसून येतात, जे आरसी भोंवतणी पुरायपणान बंद एलएच१ वळ तयार करतात, हाका फुडें आरसी-एलएच११६ संकुल अशें म्हण्टात. प्रथिन-डब्ल्यू आशिल्ल्या संकुलाच्या 2.65Å संरचनेंत प्रथिन-डब्ल्यू कडल्यान खंडीत जाल्लो 14-हेटरोडायमर LH1 आसता, ताका फुडें RC-LH114-W अशें म्हण्टात.
(अ आनी ब) संयुगाचें पृश्ठभागाचें प्रतिनिधित्व. (C आनी D) दंडांत अभिव्यक्त जाल्ले बंधीत रंगद्रव्य. (E आनी F) कोशिकाद्रव्य पृश्ठावयल्यान पळोवपाक मेळपी संयुगांत पॅप्टायड आनी LH1 उपखंड कार्टूनांत दाखयल्ले आसतात आनी प्रथिन-W अंतरांतल्यान घड्याळाच्या दिशेन क्रमांकीत करतात [Rba क्रमांकनाकडेन जुळटा. स्फेरोइड्स संकुल (13)]. LH1-α खातीर प्रथिन उपखंडाचो रंग हळडुवो आसता; LH1-β खातीर प्रथिन उपखंडाचो रंग निळो आसता; प्रथिन-डब्ल्यू खातीर प्रथिन तांबडें आसता; आरसी-एच खातीर तो सायन आसता; आरसी-एल खातीर तो ऑरेंज आसता; आरसी-एम खातीर मॅजेंटा. सहकारकांक दंडांनी, पाचवो रंग BChl आनी BPh a रेणू, जांबळो कॅरोटीनॉयड आनी हळडुवो UQ10 रेणू दाखयता. (जी आनी एच) आरसी-एलएच११४-डब्ल्यू संकुल (जी) आनी आरसी-एलएच११६ संकुल (एच) हांच्या समतुल्य प्रदेशांतल्या प्रथिन-डब्ल्यू अंतराचें व्हड केल्लें दृश्य. कोफॅक्टर जागो भरपाच्या रुपांत दाखयतात, किलेटेड क्विनोन निळ्या रंगान दाखयतात. प्रथिन-डब्ल्यू अंतर (G) हातूंत निळ्या खंडीत रेशेन उजवाडाक हाडटा आनी LH116 रिंगाचेर क्विनोन/क्विनोलोल प्रसारीत जावपी ल्हान बुराक (H) हातूंत काळ्या खंडीत रेशेन उजवाडाक हाडल्यात.
आकृती 1 (A आनी B) हातूंत LH1αβ हेट्रोडायमरांच्या उक्त्या वा बंद सरणींनी भरिल्लो आरसी दाखयला, तातूंतले दरेक दोन BChl आनी एक कॅरोटीनॉयड बांदता (आकृती 1, C आनी D). आदल्या अभ्यासांतल्यान आरपीएस हो एलएच१ संकुल अशें दिसून आयलां. स्पायरुलिना क्सॅन्थिनाच्या जैवसंश्लेशण मार्गांत ह्या जातींनी कॅरोटीनॉयडांची मिश्र लोकसंख्या आसता (17). पूण स्पायरोपायरोक्सॅन्थिन हें कॅरोटीनॉयड प्रबल आसून ताची घनताय समाधानकारक आसता. देखून आमी सगळ्या LH1 बंधनस्थानांचेर स्पायरोक्सॅन्थिनाचे मॉडेलिंग करपाचें निवडलें. आल्फा आनी बीटा पॉलीपॅप्टायड हे एकेच टीएमएच आसून तांचो पड्ड्याचो भायलो भाग ल्हान आसता (आकृती १, अ, ब, ई आनी एफ). C-अंतराचेर 17 अवशेशांची घनताय दिसूंक नासली तरी दोनूय संयुगांत आल्फा पॉलीपॅप्टायडाची Met1 पासून Ala46 मेरेन विच्छेदन जालें. β पॉलीपॅप्टायड RC-LH116 हातूंत Gly4 वयल्यान Tyr52 मेरेन, आनी RC-LH114-W हातूंत Ser5 वयल्यान Tyr52 मेरेन उणें जालें. ३ वा ४ एन-टर्मिनल वा १३ सी-टर्मिनल अवशेशांची घनताय दिसूंक नाशिल्ली (आकृती S1). रानटी प्रकारच्या जातीपसून तयार केल्ल्या मिश्र आरसी-एलएच१ संकुलाचें द्रव्यमान वर्णपटमापन विश्लेशणावरवीं गळून पडपी प्रदेश ह्या पॅप्टायडांच्या विषम विच्छेदनाचो परिणाम आशिल्ल्याचें दिसून आयलें (आकृती S1 आनी S2). तशेंच α-Met1 चें N-टर्मिनल फॉर्मिलेशन दिसून आयलें (f). विश्लेशणावरवीं α-पॅप्टायडांत fMet1 ते Asp42/Ala46/Ala47/Ala50 अशे अवशेश आसतात आनी β-पॅप्टायडांत Ser2 ते Ala53 अशे अवशेश आसतात अशें दिसून आयलें, जें उण्या तापमानाच्या ईएम घनताय नकाशाकडेन बरोच जुळटा.
α-His29 आनी β-His36 हांच्या समन्वयाक लागून BChls तोंडपाठ जाता; दरेक αβ विषमयुग्मज आपल्या शेजाऱ्यांवांगडा एकठांय येवन आरसी भोंवतणी उक्तो वळ (RC-LH114-W) वा बंद वळ (RC-LH116) तयार जाता The exciton coupled pigment array (आकृती 1, C आनी D). आरसी-एलएच११४-डब्ल्यूच्या ८७७ एनएम पट्ट्याकडेन तुळा केल्यार आरसी-एलएच११६ च्या ८८० एनएम शोशण तांबड्या स्थलांतरांत ३ एनएम आसता (आकृती २ अ). पूण वर्तुळाकार द्विवर्णता वर्णपट चड करून सारकोच आसता (आकृती 2B), हाचेवयल्यान उक्त्या आनी बंद वळींमदीं स्पश्ट फरक आसलो तरी बीसीएचल्सचें थळावें वातावरण खूब सारकें आसा अशें दिसून येता. शोशण तांबडो स्थलांतर हो उश्णताय गती उणी जाल्ल्यान आनी बंद वळीचेर वाडिल्ली स्थिरताय (18, 19), बंद वळीक लागून जावपी रंगद्रव्य जोडणींतल्या बदलाचो (20, 21) वा ह्या दोन परिणामांचो मेळ (11) जावं येता.
(अ) पराबैंगनी/दृश्यमान/अवरक्त नियर शोशण वर्णपट, ताच्या शिखरांक तांच्या अनुरूप रंगद्रव्यांनी चिन्नीत केल्लें आसता आनी ७७५ एनएमचेर बीपीएच शिखराचेर सामान्य केल्लें आसता. (B) 805 एनएमचेर BChl शोशणाक सामान्य केल्लो वर्तुळाकार द्विवर्णता वर्णपट. (C आनी D) RC-LH114-W संकुल (C) आनी RC-LH116 संकुल (D) हांच्या वेळ-निर्णयित शोशण वर्णपटांतल्यान वेंचून काडिल्ले ΔA वर्णपट. चड बरी तुळा करपाखातीर सगळ्या वर्णपटांचें 0.2 ps चेर −A च्या ∆A मेरेन सामान्यीकरण करतात. (E) UQ2 च्या वेगवेगळ्या सांद्रतायेच्या आदारान किरणोत्सर्ग केल्या उपरांत सायटोक्रोम c2 ऑक्सिडीभवनाचो दर (कच्चो म्हायती खातीर आकृती S8 पळयात). (F) उण्या, मध्यम वा चड तीव्रतेच्या उजवाडाखाला (अनुक्रमान १०, ३० वा ३००μMm-2 s-1) वाडिल्ल्या पेशींत शुध्द केल्ल्या संकुलांतले प्रथिन डब्ल्यू आनी आरसी-एल उपखंड आनी वेगळे केल्ल्या पड्ड्याच्या प्रमाणांत. एसडीएस-पॉलीऍक्रेलामायड जेल विद्युत् संचलन आनी प्रतिकारशक्ती परीक्षेवरवीं प्रथिनांची पातळी थारावप (कच्चो म्हायतीखातीर आकृती S9 पळयात). शुध्द केल्ल्या आरसी-एलएच११४-डब्ल्यू संकुलाच्या सापेक्ष प्रमाण थारावचें. संकुलाच्या आरसी-एल आनी प्रथिन-डब्ल्यू हांचें स्टोइकियोमेट्रीक प्रमाण १:१ आसता.
RC-LH114-W (आकृती 1, A, C, आनी E) च्या विकृत αβ14 लूपांतल्या 1 व्या सुवातेर आशिल्ले BChls RC-LH116 (आकृती 1, B, D, आनी F, आनी आकृती S3) हातूंतल्या समतुल्य BChls परस RC प्राथमिक दात्याक (P) 6.8Å लागीं आसतात; पूण दोन संयुगांच्या क्षणिक शोशण गतिकीवयल्यान आरसी-एलएच११४-डब्ल्यू आनी आरसी-एलएच११६ हांचेखातीर एलएच१ ते आरसीमेरेनचे उत्तेजन ऊर्जा हस्तांतरण काळ स्थिरांक ४० ±४ आनी ४४±३ पीएस अशें दिसून येता (आकृती २). , सी आनी डी, आकृती S4 आनी कोश्टक S2). तशेंच आरसी भितर इलॅक्ट्रॉनीक हस्तांतरणांत व्हडलोसो फरक दिसना (आकृती एस५ आनी संबंदीत पूरक मजकूर). LH1 आनी RC-P हांचेमदल्या ऊर्जा हस्तांतरण काळाचो लागींचो पत्रवेव्हार दोन LH1 वळींंतल्या चडशा BChl च्या सारकेच अंतर, कोन आनी संभाव्य ऊर्जा हाका लागून जाता असो आमी दुबाव घेतात. उण्यांत उणें अंतर पावपाखातीर एलएच१ ऊर्जा नमुन्याचो सोद घेवप उपअनुकूल सुवातींसावन आरसीमेरेन थेट ऊर्जा हस्तांतरणापरस बेगीन जायना अशें दिसता. आरसी-एलएच११४-डब्ल्यू हातूंतल्या उक्त्या वळीच्या एलएच१ वळीकय संरचनात्मक विश्लेशणाखातीर उण्या तापमानाच्या परिस्थितींत म्हत्वाची उश्णताय गती जावं येता आनी आरसी १ च्या सुवातेर आशिल्ल्या βBChls च्या रंगद्रव्याच्या अंतरापरस कोठारांतल्या तापमानांत चड लांब αβ14 रिंग संरचना आसता.
आरसी-एलएच११६ संकुलांत ३२ बीसीएचएल आनी १६ कॅरोटीनॉयड आसतात आनी ताची एकंदर वेवस्था थर्मोक्रोमॅटियम (Tch.) पिडपिडम [प्रथिन डेटा बँक (पीडीबी) आयडी ५वाय५एस] (९), थायोर्होडोव्हिब्रिओ (Trv.) ९७० जात ( पीडीबी आयडी ७सी९आर) (१२) आनी पाचव्या रंगांतल्यान मेळिल्ले वेवस्थेसारकीच आसता शैवाल (Blc.viridis) (पीडीबी आयडी 6ET5) (10). संरेखण केल्या उपरांत αβ विषमयुग्मांच्या सुवातेर फकत ल्हान ल्हान विचलन दिसून आयलें, खास करून १-५, १५ आनी १६ (आकृती S6). प्रथिन-डब्ल्यू आशिल्ल्यान एलएच१ च्या संरचनेचेर म्हत्वाचो परिणाम जाता. ताचे तीन टीएमएच ल्हान वळींनी जोडिल्ले आसून तातूंत एन-टर्मिनल संकुलाच्या लुमेन वटेन आनी सी-टर्मिनल सायटोप्लाझ्मीक वटेन आसता (आकृती १ अ आनी ३, अ ते डी). प्रथिन-डब्ल्यू चड करून जलदगती आसता (आकृती ३ ब), आनी टीएमएच२ आनी टीएमएच३ एलएच१αβ-१४ हांचेकडेन संपर्क सादून पड्ड्याभायर पृश्ठभाग तयार करतात (आकृती ३, ब आनी ई ते जी). संपर्क मुखेलपणान पड्ड्याभायर आशिल्ल्या प्रदेशांतल्या Phe, Leu आनी Val अवशेशांनी तयार जाता. ह्या अवशेशांत जलदगती अॅमिनो अॅसिड आनी αβ-14 रंगद्रव्यांचो रास केल्लो आसता. कांय ध्रुवीय अवशेशांचोय ह्या परस्पर क्रियांत वांटो आसता, तातूंत जटिल पोकळीच्या पृश्ठाचेर W-Thr68 आनी β-Trp42 हांचेमदलें हायड्रोजन बंध आसता (आकृती 3, F आनी G). कोशिकाद्रव्याच्या पृश्ठाचेर Gln34 हें αβ-14 कॅरोटीनॉयडांच्या कीटो गटाक लागीं आसता. तेभायर n-dodecyl β-d-maltoside (β-DDM) रेणू विरगळून ताची जलदगती शेंपडी प्रथिन-W आनी αβ-14 हांचेमदल्या संपर्कस्थानामेरेन पातळ्ळी आनी लिपिड शेंपडी कुडींत आसूं येता. तशेंच प्रथिन डब्ल्यू आनी आरसीएच हांचे सी-टर्मिनल रिझोल्यूशन प्रदेश खूब लागीं आसतात, पूण विशिश्ट परस्पर क्रिया तयार करपाच्या व्याप्तींत नात हें आमी लक्षांत घेतलें (आकृती 1, अ आनी ई). पूण ह्या दोन प्रथिनांच्या अनिर्णीत C-अंतराच्या अॅमिनो अॅसिडांत परस्पर क्रिया आसूं येता, जाका लागून आरसी-एलएच११४-डब्ल्यू संकुलाच्या संयोजना वेळार प्रथिन-डब्ल्यूची भरती करपाची यंत्रणा मेळूं येता.
(अ) कार्टुन रुपांत LH1αβ14 कडेन संपर्क सादपी प्रथिन-डब्ल्यू हातूंत दंड आकाराची बाजूची साखळी (तांबडी) आसता, जी विद्युत्स्थिर विभव आकृतीच्या एका भागांत (0.13 समोच्च पातळेचो पारदर्शक राशीचो पृश्ठभाग) दाखयला. (B) जलदगती रंगाच्या पृश्ठान दाखयल्लें प्रथिन-डब्ल्यू. ध्रुवीय आनी आघात आशिल्ले वाठार सायना, जलदगती आशिल्ले वाठार धव्या रंगान आनी खर जलदगती आशिल्ले वाठार संत्र्याच्या रंगान दाखयल्यात. (C आनी D) कार्टूनांत दाखयल्लें प्रथिन-W, ताची दिका (A) (C) प्रमाण आसता, आनी 180° (D) घुंवडायल्ली आसता. क्रमांतल्या स्थितीप्रमाण वेगळे करपाक येवपी अवशेश इंद्रधनुष्य रंग येवजण आपणायतात, जंय N-अंतर निळो आनी C-अंतर तांबडो आसता. (E) (A) प्रमाण प्रथिन-W आनी प्रथिन-W:LH1 च्या संपर्कस्थानी आशिल्ले अवशेश जोडिल्ले चिन्नां आशिल्ल्या दंडांनी दाखयतात. (F) कार्टून-डब्ल्यू हें कार्टून प्रतिनिधीत्वांतल्या (E) आनी LH1αβ14 हांच्या सापेक्ष आनी बार प्रतिनिधीत्वांतल्या संवाद अवशेशांच्या सापेक्ष ९०° घुंवडायतात. बीटा पॉलीपॅप्टायडापसून उब्या अवशेशांचेर लेबल लायतात. सहकारक आकृती १ च्या रंगाकडेन जुळपी पट्टी म्हणून दाखयला, विघटन जाल्लो β-डीडीएम राशींत आनी ऑक्सिजन तांबड्या रंगान दाखयला. (G) (F) हातूंतलें दृश्य १८०° घुंवडायल्लें आसून तातूंत लेबल आशिल्ल्या आल्फा पॉलीपॅप्टायडाचे मुखेल अवशेश आसतात.
प्रथिन-डब्ल्यू αβ विषमयुग्माच्या जाग्यार (आकृती 1F तलो 15वो) लूप बंद जावपाक आडखळ हाडटा आनी पयल्या तीन αβ विषमयुग्मांक तिरपतात. पयल्या αβ-1 हेटरोडायमरचो चडांत चड झुकपाचो कोन फिल्म सामान्याच्या सापेक्ष 25° ते 29° आशिल्लो अशें दिसून आयलें (आकृती 1, A आनी E), जो आरसी ए तीक्ष्ण विपरीतताय-LH116 हातूंतल्या αβ-1 च्या 2° ते 8° झुकपाक लागून तयार जाल्लो (आकृती 1, B आनी F). दुसरो आनी तिसरो विषमयुग्म अनुक्रमान १२° ते २२° आनी ५° ते १०° अशी ओडून आसता. आरसीच्या स्टॅरिक आडमेळ्याक लागून αβ-1 च्या तिरप्यांत αβ ची दुसरी जोडी (जी आकृती 1F तल्या सोळाव्या αβ कडेन जुळटा) आस्पावना, अशे तरेन LH1 रिंगांत स्पश्ट अंतर तयार जाता (आकृती 1, A आनी E) . दोन αβ हेटरोडायमर नाशिल्ल्यान, चार बीसीएचएल आनी दोन कॅरोटीनॉयडांचें लुकसाण जाल्ल्यान, खंयचोच कॅरोटीनॉयड घुंवडायल्ल्या αβ-1 उपखंडाक जोडना आनी ताका लागून LH114-W रिंग तयार जाता, तातूंत 13 कॅरोटीनॉयड शाकाहारी आनी 28 BChls आसतात. αβ1 ते 7 प्रदेशांतल्या दोन संयुगांचे थळावे रिझोल्यूशन अदमास उरिल्ल्या LH1 लूपापरस उणे आसतात, जे आरसी क्यूबी स्थळाक लागीं आशिल्ल्या LH1 उपखंडाच्या अंतर्निहित प्लास्टिसिटीचें प्रतिबिंबीत करपाक शकतात (आकृती 4) .
आरसी-एलएच११४-डब्ल्यू (अ आनी ब) आनी आरसी-एलएच११६ (क आनी डी) हांचीं चित्रां आकृती १.(ब आनी ड) च्या एकाच वयल्या दृश्यावयल्यान/बाजूच्या दृश्यावयल्यान (अ आनी ब) (अ आनी क) आनी पोकळी पृश्ठावयल्यान दाखयल्यात. रंगीत कळयो उजवे वटेन दाखयल्यात.
१:१४ हें स्टोइकियोमेट्रीक प्रमाण आशिल्लें आनीक एकमेव खाशेलें कोर संकुल म्हळ्यार ऱ्होडोकोकस स्फेरोइड्स (Rba.) आरसी-एलएच१-पफएक्स डायमर (१३). पूण प्रथिन डब्ल्यू आनी पफएक्स हांचेमदीं स्पश्ट समरूपताय नासता, आनी तांचो तांच्या तांच्या एलएच१ संरचनेचेर म्हत्वाचो परिणाम जाता. PufX हें एकूच टीएमएच आसून तातूंत एन-टर्मिनल सायटोप्लाझ्मीक डोमेन आसता आनी तो आरसी-एच उपखंडाच्या (13) सायटोप्लाझ्मीक बाजूकडेन Rps कडेन जुळपी सुवातेर संपर्क सादता. पॅलुस्ट्रिस एलएच116αβ-16. PufX RC-LH1 आनी सायटोक्रोम bcl संकुल हांचेमदल्या क्विनोन/क्विनोलोन विनिमयाक एक वाहिनी तयार करता आनी सगळ्या Rba मदीं आसता. स्फेरोइड्स कोर संकुल (13). मोनोमर-मोनोमर संवाद जरी Rba. स्फेरोइड्स आरसी-एलएच१-पफएक्स डायमर आरसी-एलएच११४-डब्ल्यू हातूंतल्या प्रथिन डब्ल्यूच्या बंधनस्थानाचेर आसता आनी पफएक्स आनी प्रथिन-डब्ल्यू हांकां लागून जावपी अंतर समतुल्य सुवातेर आसता (आकृती एस७ अ). आरसी-एलएच११४-डब्ल्यू हातूंतलो अंतर स्यूडोमोनास रोसिया एलएच१ ह्या कल्पित क्विनोन चॅनल (८)कडेनय जुळटा, जो प्रथिन डब्ल्यू वा पफएक्स हांचेकडेन संबंदीत नाशिल्ल्या पॅप्टायडांवरवीं तयार जाता (आकृती एस७ बी). तेभायर बीएलसींतलो क्विनोन चॅनल. एक γ उपखंड (7) वगळून तयार जाल्लो पन्नास पाचवो LH1 होच अशेच सुवातेर आसता (आकृती S7C). वेगवेगळ्या प्रथिनांनी मध्यस्थी केल्ली आसली तरी आरसी-एलएच१ संकुलांतल्या सामान्य सुवातेर ह्या क्विनोन/क्विनोलोल वाहिनीचें दिसप हें अभिसरण उत्क्रांतीचें एक उदाहरण अशें दिसता, ताचेवयल्यान डब्ल्यू प्रथिनांनी तयार केल्लो अंतर क्विनोन वाहिनी म्हूण काम करपाक शकता अशें दिसून येता.
LH114-W लूपांतल्या अंतराक लागून प्रथिनांतल्या भशेन प्रथिन छिद्रांतल्यान दोनूय डोमेन जोडचेपरस RC-LH114-W संकुलाच्या अंतर्गत जाग्या आनी बल्क पड्ड्यामदीं अखंड पड्ड्याचो प्रदेश तयार जावंक शकता (आकृती 1G. आरसी-एलएच११६ संकुल बंद Tch सारकोच आसता. सुयेसारको संयुग (22) (आकृती 1H). पड्ड्यावरवीं क्विनोनाचें प्रसारण अरुंद प्रथिन वाहिनींतल्यान जावपी प्रसारापरस चड नेटान जाता देखून उक्त्या एलएच११४-डब्ल्यू वळीक लागून बंद एलएच११६ वळीपरस बेगीन आरसी उलाढाल जावंक शकता आनी आरसींत क्विनोनाचें प्रसारण चड मर्यादीत आसूं येता. प्रथिन डब्ल्यू आरसी वरवीं क्विनोनांच्या रुपांतराचेर परिणाम करता काय ना हाची चांचणी करपाखातीर आमी युबिक्विनोन 2 (UQ2) (सैमीक UQ10 चो अॅनालॉग आनी ताचेपरस ल्हान आयसोप्रीन शेंपडी) ह्या खाशेल्या सांद्रतायेचेर सायटोक्रोम ऑक्सिडीभवन परीक्षण केलें (आकृती 2E). किलेटेड क्विनोन आशिल्ल्यान दिसपी मायकेलीस स्थिरांक (RC-LH114-W आनी RC-LH116 अनुक्रमान 0.2±0.1μM आनी 0.5±0.2μM खातीर योग्य) अचूकपणान थारावपाक आडमेळीं येतात तरी आरसी-LH114-W ( 4.6±0.2 e-RC-1 s-1) चें चडांत चड प्रमाण आसा आरसी-एलएच११६ (३.६±०.१ ई-आरसी-१ एस-१) परस २८±५% व्हड आसता.
आमी सुरवेक अदमास काडलो की प्रथिन-डब्ल्यू कोर संकुलांतल्या सुमार १०% भागांत आसता (१६); हांगा उण्या उजवाडाच्या, मध्यम उजवाडाच्या आनी चड उजवाडाच्या वाडीच्या पेशींचें व्याप्तीचें प्रमाण अनुक्रमान १५±०.६%, ११±१% आनी ०.९±०.५ आसता (आकृती २F). द्रव्यमान वर्णपटमापनाचे परिमाणात्मक तुळा केल्यार हिस्टिडीन टॅग घालून रानटी प्रकारच्या जातींच्या तुलनेत प्रथिन-डब्ल्यूची सापेक्ष भरपूर प्रमाणांत उणी जावंक नाशिल्ल्याचें दिसून आयलें (P = 0.59), देखून ह्यो पातळी सुदारीत प्रथिन-डब्ल्यूची कृत्रिम वस्तू न्हय (आकृती S10). पूण आरसी-एलएच१ संकुलांतल्या प्रथिन-डब्ल्यूची ही उणी व्याप्ती आशिल्ल्यान कांय आरसींक वेगान उलटपाक मेळूं येता, जाका लागून आरसी-एलएच११६ संकुलांतलो मंद क्विनोन/क्विनोलोन विनिमय उणो जाता. आमी लक्षांत घेतलें की चड उजवाडाचो व्याप्ती दर हालींच्या ट्रान्सक्रिटॉमिक्स डेटाकडेन विसंगत आसा, जें दाखयता की pufW जीन अभिव्यक्ती खर उजवाडाखाला वाडटा (आकृती S11) (23). pufW प्रतिलिपी आनी RC-LH1 संकुलांत प्रथिन-W आस्पावप हांचेमदलो फरक गोंदळाची आसून तो प्रथिनाच्या जटिल नियंत्रणाचें प्रतिबिंब आसूं येता.
आरसी-एलएच११४-डब्ल्यू हातूंत ६ कार्डियोलिपिन (सीडीएल), ७ फॉस्फेटिडिलकोलीन (पीओपीसी), १ फॉस्फेटिडिलग्लिसरॉल (पीओपीजी) आनी २९ बीटा-डीडीएम रेणू वांटून तातूंत ६ सीडीएल, २४ पीओपीसी, २ पीओपीजी आनी १२ बीटीडीडीएम हांचें मॉडेलिंग करतात. आरसी-एलएच११६ (आकृती ५, अ आनी ब). ह्या दोन संरचनेंत सीडीएल चड करून संकुलाच्या सायटोप्लाझ्मीक वटेन आसता, जाल्यार पीओपीसी, पीओपीजी आनी बीटा-डीडीएम चड करून लुमिनल बाजूचेर आसतात. आरसी-एलएच११४-डब्ल्यू संकुलाच्या αβ-१ ते αβ-६ प्रदेशांत दोन लिपिड आनी डिटर्जंट रेणू वेगळे केल्ले (आकृती ५ अ), आनी आरसी-एलएच११६ च्या समतुल्य प्रदेशांत पांच वेगळे केल्ले (आकृती ५ ब). संकुलाचे दुसरे वटेन मुखेलपणान सीडीएल, आरसी आनी αβ-7 ते αβ-13 हांचेमदीं जमिल्ले चड लिपिड मेळ्ळे (आकृती 5, अ आनी ब). हेर संरचनात्मक नदरेन विरगळिल्ले लिपिड आनी डिटर्जंट एलएच१ रिंगाच्या भायर आसतात आनी बरी विरगळिल्लीं ऍसिल साखळी एलएच१ उपखंडांमदीं पातळ्ळ्यात, तांकां आरसी-एलएच११४-डब्ल्यू हातूंत तात्पुरतें β-डीडीएम अशें नांव दिलां आनी आरसी ए बीटा-डीडीएम आनी पीओपीसी-एलएच११६ हांच्या मिश्रणांत β-डीडीएम अशें व्याख्या केल्लें आसता. आमच्या संरचनेंत किलेटिंग लिपिड आनी डिटर्जंट हांची सारकीच सुवात पळयल्यार तीं शारिरीक नदरेन संबंदीत बंधनस्थानां आसात अशें दिसून येता (आकृती S12A). Tch हातूंतल्या समतुल्य रेणूंच्या सुवातींनीय बरी सुसंगती आसता. सौम्य आनी Trv. ९७० आरसी-एलएच१ जात (आकृती एस१२, ब ते ई) (९, १२) आनी लिपिड हेड गटाच्या हायड्रोजन-बंधन अवशेशांनी क्रम संरेखणांत (आकृती एस१३) फाव तसो बरो संवर्धन दाखयलो, हाचेवयल्यान आरसी (२४) कडेन बंधन करपी संरक्षित सीडीएल, हीं सुवाती आरसी-एलएच१ संकुलांत संरक्षित आसूं येतात अशें दिसून येता.
(A आनी B) RC-LH114-W (A) आनी RC-LH116 (B) पॅप्टायडांचें चित्रण कार्टूनांतल्यान आनी रंगद्रव्यांचें चित्रण दंडांनी केलां, आकृती 1 तल्या रंग येवजणेचो उपेग करून.लिपिड तांबड्या रंगान दाखयल्यात आनी डिटर्जंट करड्या रंगान दाखयल्यात. आरसी क्यूए आनी क्यूबी साइटांक बांदिल्लो यूक्यू हळडुवो आसता, जाल्यार वेगळो केल्लो यूक्यू निळो आसता. (C आनी D) (A) आनी (B) सारकींच मतां, लिपिड वगळ्ळ्यात. (ई ते जी) आरसी-एलएच११६ कडल्यान क्यू१(ई), क्यू२(एफ) आनी क्यू३(जी) हांचें वाडिल्लें दृश्य, एकामेकांचेर परिणाम करपी बाजूचीं साखळीं आशिल्लीं. हायड्रोजन बंध काळ्या खंडीत रेशां प्रमाण दाखयल्यात.
आरसी-एलएच११६ हातूंत आघात वेगळे करपाचे प्रक्रियेंत इलॅक्ट्रॉन हस्तांतरणांत वांटो घेवपी आरसी क्यूए आनी क्यूबी यूक्यू हे दोनूय प्रकार तांच्या बंधनस्थानांत विघटन जातात. पूण आरसी-एलएच११४-डब्ल्यू हातूंत क्यूबी क्विनोन सोडोवंक ना आनी ताचेर सकयल सविस्तर चर्चा जातली. क्यूए आनी क्यूबी क्विनोनावांगडाच दोन किलेटेड यूक्यू रेणू (आरसी आनी एलएच१ रिंगांमदीं आशिल्ले) आरसी-एलएच११४-डब्ल्यू संरचनेंत तांच्या बऱ्या रिझोल्यूशनाच्या हेड गटांप्रमाण (अनुक्रमान क्यू१ आनी क्यू२ हातूंत आशिल्ले) वाटप करतात. अंतर). आकृती ५ सी). क्यू1 कडेन दोन आयसोप्रीन एकक दितात आनी घनताय नकाशांत क्यू2 च्या पुराय 10 आयसोप्रीन शेंपडींचें निराकरण जाता. आरसी-एलएच११६ च्या संरचनेंत तीन किलेटेड यूक्यू१० रेणू (क्यू१ ते क्यू३, आकृती ५ डी) विरगळ्ळे आनी सगळ्या रेणूंची पुराय शेंपडींत स्पश्ट घनताय आसता (आकृती ५, डी ते जी). दोन संरचनेंत क्यू१ आनी क्यू२ हांच्या क्विनोन हेड गटांच्या सुवातींनी उत्कृश्ट सुसंगती आसता (आकृती एस१२एफ), आनी तीं फकत आरसीकडेन परस्पर क्रिया करतात. क्यू१ आरसी-एलएच११४-डब्ल्यूच्या डब्ल्यू अंतराच्या प्रवेशदाराचेर (आकृती १जी आनी ५, सी, डी आनी ई) आनी क्यू२ क्यूबी बंधनस्थानालागीं (आकृती ५, सी, डी) आनी एफ) आसता. संरक्षित L-Trp143 आनी L-Trp269 अवशेश Q1 आनी Q2 हांकां खूब लागीं आसतात आनी संभाव्य π-स्टॅकिंग परस्पर क्रिया दितात (आकृती 5, E आनी F, आनी आकृती S12). Q1 च्या भायल्या ऑक्सिजनांतल्यान 3.0 Å अंतराचेर आशिल्लो L-Gln88 हाका लागून हायड्रोजन बंध घट जाता (आकृती 5E); हो अवशेश सगळ्यांत पयसुल्लो संबंद सोडल्यार सगळ्या आरसींत सांबाळून दवरतात (आकृती S13). L-Ser91 हें चडशा हेर आरसींत Thr च्या रुढीवादी रितीन प्रतिस्थापित केल्लें आसता (आकृती S13), Q1 च्या मिथिल ऑक्सिजनांतल्यान 3.8 एंगस्ट्रॉम आसता आनी दुबळे हायड्रोजन बंध दिवंक शकतात (आकृती 5E). क्यू३ हातूंत विशिश्ट परस्पर क्रिया दिसना, पूण आरसी-एम उपखंड आनी एलएच१-अॅलॅफा उपखंड ५ ते ६ हांचेमदल्या जलदगती प्रदेशांत तो आसता (आकृती ५, डी आनी जी). क्यू१, क्यू२ आनी क्यू३ वा लागसारच्या किलेटेड क्विनोनांचोय Tch. सौम्य, त्र्व. ताण ९७० आनी बीएलसी. परितारिका संरचना (९, १०, १२) आरसी-एलएच१ संकुलांतल्या संरक्षित सहाय्यक क्विनोन बंधनस्थानाकडेन दाखयता (आकृती एस१२जी). आरसी-एलएच११६ हातूंतले पांच विघटन जाल्ले यूक्यू उच्च कार्यक्षमताय द्रव वर्णपटलेखन (HPLC) पद्दतीन थारायिल्ल्या दर एका संकुलाच्या ५.८±०.७ प्रमाणाकडेन बरे तरेन जुळटात, जाल्यार आरसी-एलएच११४-डब्ल्यू हातूंतले तीन विघटन जाल्ले यूक्यू परस उणे आसतात.
छद्म सममितीय एल आनी एम पॉलीपॅप्टायडांत दरेकीं पांच टीएमएच आसतात आनी एक बीसीएचएल डायमेर, दोन बीसीएचएल मोनोमर, दोन बॅक्टेरियोफेज (बीपीएच) मोनोमर आनी एक बिगर हीम लोखण आनी एक वा दोन यूक्यू१० रेणू एकठांय करपी विषम डायमर तयार करतात. टर्मिनल कीटोन गटाचेर हायड्रोजन बंध आशिल्ल्यान आनी आरपीएसांत ताचो ज्ञात संचय हाका लागून कॅरोटीनॉयडांचो एम-उपखंडांत आस्पाव जाता, ताका सिस-३,४-डिहायड्रोरोडोपिन अशें नांव दिलां. जाती (25) हांचो आस्पाव जाता. आरसी-एच चें भायलें पड्ड्याचें क्षेत्र एकाच टीएमएच वरवीं पड्ड्याक नांगरून आसता. एकंदर आरसी संरचना संबंदीत जातींच्या (देखीक- आरबीए) तीन उपखंड आरसी सारकीच आसता. स्फेरोइड्स (पीडीबी आयडी: ३आय४डी). बीसीएचएल आनी बीपीएच हांचे स्थूल चक्र, कॅरोटीनॉयड फाटीचो कणो आनी बिगर हीम लोखण ह्या संरचनेच्या रिझोल्यूशन श्रेणींत आडखळून पडटात, तशेंच क्यूए सुवातेर आशिल्लो यूक्यू१० मुखेल गट आनी आरसी-एलएच११६ हांगाचो क्यूबी क्विनोन (आकृती एस१५).
वेगवेगळ्या क्यूबी स्थळ व्याप्ती दर आशिल्ल्या दोन आरसी संरचनेची उपलब्धताय क्यूबी क्विनोन बंधनावांगडा जावपी सुसंगत संरचनेच्या बदलांची तपासणी करपाची नवी संद दिता. आरसी-एलएच११६ संकुलांत क्यूबी क्विनोन पुरायपणान बांदिल्ल्या “प्रोक्सिमल” स्थितींत (२६) आसता, पूण आरसी-एलएच११४-डब्ल्यूच्या वेगळेपणांत क्यूबी क्विनोन नासता. आरसी-एलएच११४-डब्ल्यू हातूंत क्यूबी क्विनोन ना, हें अजाप दिसता कारण संकुल सक्रिय आसता, संरचनात्मक रितीन रिझोल्यूशन केल्ल्या क्यूबी क्विनोनावांगडा आरसी-एलएच११६ संयुगापरस चड. दोन LH1 रिंग जरी सुमार स क्विनोन किलेट करतात तरी बंद आरसी-LH116 रिंगांत पांच संरचनात्मक रितीन विरगळटात, जाल्यार उक्त्या RC-LH114-W रिंगांत फकत तीन रचणुकेचे नदरेन मर्यादीत आसतात . हो वाडिल्लो संरचनात्मक विकार आरसी-एलएच११४-डब्ल्यू क्यूबी स्थळांचें नेटान बदल जावप, संकुलांतली क्विनोन गतिकी नेटान जावप आनी एलएच१ वळ पार करपाची शक्यताय वाडप हांचें प्रतिबिंब आसूं येता. आमी सुचयतात की आरसी-एलएच114-डब्ल्यूच्या आरसी क्यूबी स्थळांत यूक्यूचो उणाव चड गुंतागुंतीचो आनी चड सक्रिय संयुगाचो परिणाम आसूं येता आनी आरसी-एलएच114-डब्ल्यूची क्यूबी स्थळ यूक्यू उलाढालींत रोखडीच गोठल्या विशिश्ट अवस्था (क्यूबी स्थळाचो प्रवेश बंद केला) हे क्रियाशीलतेची रचना दाखयता.
क्यूबी नासतना L-Phe217 चें ताचेवांगडा घुंवप UQ10 बंधनाकडेन विसंगत स्थितींत जाता, कारण ताका लागून शेंपडेच्या पयल्या आयसोप्रीन एककाकडेन अवकाशीय टक्कर जातली (आकृती 6A). तेभायर स्पश्ट मुखेल संरचनेचे बदल स्पश्ट दिसतात, खास करून हेलिक्स डी (टीएमएच डी आनी ई हांचेमदल्या वळींतलो ल्हान हेलिक्स) जंय L-Phe217 क्यूबी बंधन खिशांत स्थलांतरीत जाता आनी L-Tyr223 चें घुंवप (आकृती 6A ) M-Asp45 चौकटीकडेन आशिल्लें हायड्रोजन बंध मोडून क्यूबी बंधनस्थानाचो प्रवेश बंद करपाखातीर (आकृती 6 बी) हें नांव. ताच्या मुळाक हेलिक्स डी पिव्होट जाता, L-Ser209 चो Cα 0.33Å, जाल्यार L-Val221Cα 3.52Å स्थलांतरीत जाता. दोनूय संरचनेंत सुपरइम्पोझ करपाक येवपी टीएमएच डी आनी ई हातूंत निरिक्षण करपासारके बदल दिसनात (आकृती 6 अ). आमकां खबर आसा तितले सैमीक आरसींतली ही पयली रचणूक जी क्यूबी स्थळ बंद करता. पुराय (QB-bound) संरचनेकडेन तुळा केल्यार क्विनोन उणें जावचेपयलीं ताका क्विनोनांत प्रवेश करपाखातीर संरचनेंत बदल करचो पडटा अशें दिसून येता. L-Phe217 घुंवून क्विनोन हेड गटाकडेन π-स्टॅकिंग परस्पर क्रिया तयार जाता आनी हेलिक्स भायल्यान स्थलांतरीत जावन L-Gly222 च्या स्कॅलेटनाक आनी L-Tyr223 च्या बाजूच्या साखळीक स्थिर हायड्रोजन बंध संरचनेचें हायड्रोजन बंध जाळें तयार करपाक मेळटा (आकृती 6, A आनी C).
(अ) होलोग्राम (एल साखळी, संत्र/एम साखळी, मॅजेंटा) आनी एपो (राख) संरचनेचो आडखळ आशिल्लो कार्टून, जातूंत कळ अवशेश दंडसारक्या प्रतिनिधीत्वाच्या रुपांत दाखयतात. UQ10 हें हळडुव्या पट्ट्यान दाखयतात. बिंदू रेखा पुराय संरचनेंत तयार जाल्लीं हायड्रोजन बंध दाखयता. (B आनी C) एपोलिपोप्रोटीन आनी पुराय रिंग संरचनेचें पृश्ठभागाचें प्रतिनिधित्व, अनुक्रमान L-Phe217 च्या बाजूच्या साखळी ऑक्सिजनाचेर निळ्या आनी L-Tyr223 तांबड्या रंगान उजवाडाक हाडपी. एल उपखंड संत्रे रंगाचो आसता; एम आनी एच उपखंड रंगीत नासतात. (D आनी E) एपोलिपोप्रोटीन (D) आनी पुराय (E) आरसी क्यूबी स्थळ [अनुक्रमान (A) प्रमाण रंग] आनी थर्मोफिलस थर्मोफिलस PSII (पाचवो, प्लास्टीक क्विनोना वांगडा निळो; PDB ID: 3WU2) संरेखित करात (58).
अनपेक्षीतपणान एलएच१ नाशिल्ल्या क्यूबी-उणाव आशिल्ल्या आरसींच्यो जायत्यो संरचना उपलब्ध आसल्यो तरी ह्या अभ्यासांत दिसून आयिल्ले संरचनेंत बदल जाले नात. तातूंत बीएलसी कडल्यान क्यूबी डिप्लीशन संरचना हांचो आस्पाव जाता. viridis (पीडीबी आयडी: 3पीआरसी) (27), Tch. टेपिडम (पीडीबी आयडी: १ईवायएस) (२८) आनी आरबीए. स्फेरोइड्स (PDB ID: 1OGV) (29), हे सगळे तांच्या एकंदर क्यूबी संरचनेप्रमाण चड करून सारके आसतात. 3PRC ची बारीकसाणेन तपासणी केल्यार LDAO (Lauryl Dimethyl Amine Oxide) डिटर्जंट रेणू क्यूबी स्थितीच्या प्रवेशदाराचेर बंधन करतात, जाका लागून बंद संरचनेंत परतून मांडावळ जावंक शकना अशें दिसून आयलें. 1EYS वा 1OGV हातूंत एलडीएओ जरी एकाच सुवातेर विघटन जायना तरी हे आरसी समान डिटर्जंट वापरून तयार करतात आनी देखून तोच परिणाम जावंक शकता. Rba ची स्फटिकी संरचना. सायटोक्रोम c2 (PDB ID: 1L9B) हांचेवांगडा सहस्फटिकीकृत केल्ल्या स्फेरोइड्स आरसीकय बंद क्यूबी स्थळ आशिल्ल्याचें दिसता. पूण ह्या प्रकरणांत आरसी-एम पॉलीपॅप्टायडाचो एन-अंतराचो प्रदेश (क्यू हेलिक्साचेर आशिल्ल्या Tyr अवशेशाच्या एच बंधांतल्यान क्यूबी बंधनस्थानाकडेन संपर्क सादपी) अस्वाभाविक संरचना आपणायता आनी क्यूबी संरचनेच्या बदलाचो फुडलो अभ्यास जायना (30). खात्री करपासारकें म्हणल्यार आरसी-एलएच११४-डब्ल्यू संरचनेंत एम पॉलीपॅप्टायडाची अशी विकृतताय आमी पळोवंक ना, जी आरसी-एलएच११६ आरसीच्या एन-टर्मिनल प्रदेशा सारकीच आसा. तशेंच डिटर्जंट आदारीत एलएच१ एंटीना निर्मूलन केल्या उपरांत पीडीबींतले एपोलिपोप्रोटीन आरसी विरगळ्ळे, जाका लागून आरसी आनी भोंवतणच्या एलएच१ रिंगाच्या भितरल्या पृश्ठामदल्या अंतरांतले भितरले क्विनोन कुंड आनी लिपिड ना जाले हें लक्षांत घेवचें पडटा (३१, ३२). आरसी कार्यक्षम उरता कारण तातूंत सगळे सहकारक तिगून उरतात, फकत विघटनशील क्यूबी क्विनोन सोडल्यार, जो उणो स्थीर आसता आनी तयार करपाचे प्रक्रियेंत चड करून वचून वता (33). तेभायर आरसींतल्यान एलएच१ आनी सैमीक चक्रीय लिपिड काडून उडयल्यार आघात-वेगळिल्ल्या पी+क्यूबी-अवस्थेचें आयुश्य उणें जावप अशा कार्यांचेर परिणाम जावं येता अशें वळखतात (३१, ३४, ३५). देखून आरसी भोंवतणी थळाव्या एलएच1 रिंगाच्या अस्तित्वाक लागून “बंद” क्यूबी स्थळ तिगोवन दवरूं येता, जाका लागून क्यूबी लागसारचें थळावें वातावरण तिगून उरूंक शकता असो आमी अदमास काडटात.
एपोलिपोप्रोटीन (क्यूबी क्विनोनाबगर) आनी पुराय संरचना जरी क्यूबी स्थळाच्या उलाढालीचे फकत दोन स्नॅपशॉट दाखयतात, पूण घडणुकांची माळ करचेपरस, हायड्रोक्विनोनान परतून बांदणी जावची न्हय म्हूण बंधनाक गेट करूं येता अशें संकेत मेळटात To inhibit substrate inhibition. एपोलिपोप्रोटीनाच्या क्यूबी स्थळालागीं क्विनोलोल आनी क्विनोन हांची परस्पर क्रिया वेगळी आसूं येता, जाका लागून आरसीन ताका न्हयकार दिता. क्विनोनांच्या बंधनांत आनी उणें करपाक संरचनेच्या बदलांचो वांटो आसता अशें खूब आदींसावन सुचयलां. काळखांतल्या अनुकूलना उपरांत गोठयल्ल्या आरसींची क्विनोन उणें करपाची तांक इबाडटा (36); क्ष-किरण स्फटिकशास्त्रांतल्यान हें नुकसान क्यूबी क्विनोन सक्रिय निकटवर्ती स्थितीसावन सुमार ४.५ Å अंतराचेर “भायर” संरचनेंत आडखळून पडपाक लागून जाता अशें दिसून येता (26) , 37). ही भायली बंधन संरचना ही एपोलिपोप्रोटीन आनी पुराय रिंग संरचनेमदल्या मध्यवर्ती स्थितीचो झटको आसा अशें आमी सुचयतात, जी क्विनोनाकडेन सुरवेक जावपी परस्पर क्रिया आनी क्यूबी स्थळ उगडपा उपरांत जाता.
कांय प्रकाशविवर्धक बॅक्टेरिया आनी सायनोबॅक्टेरिया, शेवणी आनी वनस्पत हांच्या पीएसआयआय संकुलांत मेळपी दुसर् या प्रकारच्या आरसीचें संरचनात्मक आनी कार्यात्मक संवर्धन आसता (38). आकृती 6 (D आनी E) हातूंत दाखयल्ल्या संरचनात्मक संरेखणांत पीएसआयआय आरसी आनी बॅक्टेरियाच्या आरसी संकुलाच्या क्यूबी स्थळामदल्या सारकेपणाचेर भर दिला. ही तुळा खूब आदींसावन क्विनोन बंधन आनी उणें करपाच्या लागींच्या संबंदीत प्रणालींचो अभ्यास करपाखातीर एक आदर्श जावन आसा. आदल्या प्रकाशनांत संरचनेच्या बदलांवांगडा क्विनोनांचें पीएसआयआय उणें जावप जाता अशें सुचयल्लें (39, 40). देखून आरसीचें उत्क्रांती संवर्धन विचारांत घेतल्यार ही आदीं पळोवंक नाशिल्ली बंधन यंत्रणा ऑक्सिजनयुक्त प्रकाशविवर्धक वनस्पतींनी पीएसआयआय आरसीच्या क्यूबी स्थळाकय लागू जावं येता.
Rps ΔpufW (लेबल नाशिल्लें pufW डिलीशन) आनी PufW-His (सैमीक pufW स्थानांतल्यान अभिव्यक्त जाल्लें C-टर्मिनल 10x His-टॅग केल्लें प्रथिन-W) जातीं. palustris CGA009 हें आमच्या आदल्या वावरांत (16) वर्णन केल्लें. हे जाती आनी समजनन रानटी प्रकारचो पालक पीवायई (दरेक ५ ग्रॅम लिटर -१) (एलबींत -८० सॅ. प्लेटी रातभर काळखांत अवायुहीन परिस्थितींत कोठारांतल्या तापमानांत दवरली आनी उपरांत एकूच वसाहत दिसमेरेन ३ ते ५ दीस ओआरएम ११६-डब्ल्यू हॅलोजन बल्बांनी (आरएस कंपोनेंट, युके) दिल्ल्या धव्या उजवाडान (~५० μmolm-2 s-1) उजवाडायली. एकूच वसाहत वापरून ०.१% (वजन/आकार) कॅसामिनो अॅसिड (हाचे फुडें एम२२ अशें म्हण्टात) पुरवण केल्ल्या १० मिलिलीटर एम२२+ माध्यमांत (४१) टीका केल्ली. संस्कृताय उण्या ऑक्सिजनाच्या परिस्थितींत काळखांत ३४ सॅ.तापमानाचेर १८० आरपीएमचेर ४८ वरां हालोवन वाडयली आनी उपरांत ७० मिलिलीटर संस्कृताय त्याच परिस्थितींत २४ वरां टीका केली. 30 मिलिलीटर सार्वत्रिक स्क्रू-टॉप पारदर्शक कंवचेच्या बाटलेंत 30 मिलिलीटर एम22 माध्यमाची टीका करपाखातीर 1 मिलिलीटर खंड आशिल्ली अर्दवायुहीन संस्कृताय वापरतात आनी निर्जंतुकीत चुंबकीय शक्तीवरवीं 48 वरां हालचालीन (~50μmolm-2 s-1) किरणोत्सर्ग करतात. उपरांत ३० मिलिलीटर संस्कृतायेक त्याच परिस्थितींत सुमार १ लिटर संस्कृतायेचें टीकाकरण केलें, उपरांत ताचो उपेग करून सुमार ९ लिटर संस्कृतायेक ~२०० μmolm-2 s-1 ह्या तापमानांत ७२ वरां उजवाडाक हाडलें. ७१३२ आरसीएफ हांगा ३० मिनटां अपक्षेपण करून पेशी एकठांय करून ~१० मिलिलीटर २० मिमी.
वितळ्ळ्या उपरांत परतून स्थलांतरीत केल्ल्या पेशींत डिऑक्सीरायबोन्युक्लियस I (मर्क, ब्रिटन), लायसोझायम (मर्क, ब्रिटन) आनी दोन रोश होलोएंझायम प्रोटीज इन्हिबिटर गुळयो (मर्क, ब्रिटन) हांचे कांय स्फटिक घालचे. २०,००० पीएसआय फ्रेंच दाब कोशिकेंत (अमिन्को, अमेरिकेचीं संयुक्त संस्थानां) कोशिकां ८ ते १२ फावटीं खंडीत जालीं. ४ सॅ.तापमानाचेर १८,५०० आरसीएफचेर १५ मिनटां अपक्षेपण करून अखंड पेशी आनी विरगळनाशिल्लो कोळसो काडल्या उपरांत ४३,००० सॅ. विरगळपी अंश काडून रंगीत पड्डो १०० ते २०० मिलिलीटर २० मिमी. स्थलांतरीत पड्ड्याक 2% (w/v) β-DDM आशिल्ल्या 20 mM tris-HCl (pH 8.0) (Anatrace, USA) हातूंत 1 वरां काळखांत 4° से. उपरांत ७० सॅ.तापमानाचेर १५०,००० आरसीएफ ४ सॅ.तापमानाचेर १ वरां विरगळपाखातीर अपक्षेपक करून उरिल्ले अविलायनी काडून उडयतात.
ΔpufW जातींतल्यान विरगळपी पड्डो 50 मिलिलीटर DEAE Sepharose आयन विनिमय स्तंभाचेर तीन स्तंभ खंड (CV) बंधन बफर [20 mM tris-HCl (pH 8.0) हातूंत 0.03% (w / v) β-DDM आशिल्लें] लायलें. दोन सीव्ही बंधन बफरांनी स्तंभ धुवचो, आनी मागीर 50 मिमी.NaCl आशिल्ल्या दोन बंधन बफरांनी स्तंभ धुवचो. आरसी-एलएच११६ संयुग १.७५ सीव्हीचेर १५० ते ३०० मिमी. २५० ते १००० एनएम हांचेमदीं शोशण वर्णपट एकठांय करून ८८० ते २८० एनएम मेरेन १ परस चड शोशण प्रमाण (A880/A280) आशिल्लो अंश दवरून तो बंधन बफरांत दोन फावटीं पातळ करचो आनी शुध्दीकरणाचेर डीईएई स्तंभाचेर परतून हीच पद्दत वापरची. A880/A280 प्रमाण 1.7 परस चड आनी A880/A805 प्रमाण 3.0 परस चड आशिल्ले अपूर्णांक पातळ करून आयन विनिमयाची तिसरी फेरी करात आनी A880/A280 प्रमाण 2.2 परस चड आनी A880/A805 प्रमाण 5.0 परस चड आशिल्ले अपूर्णांक तिगोवन दवरात. आंशिक शुध्द केल्ल्या संकुलाक अॅमिकॉन १,००,००० रेणूभार कट-ऑफ (MWCO) अपकेंद्रीय फिल्टरांत (Merck, UK) ~२ मिलिलीटर मेरेन गाळून, २०० मिमी.NaCl बफर आशिल्ल्या सुपरडेक्स २०० १६/६०० आकाराच्या वगडावपाच्या स्तंभाचेर (GE Healthcare, US) भारून उपरांत त्याच बफरांत १.५ से. आकार वगडावपाच्या अंशाचे शोशण वर्णपट एकठांय करात, आनी A880/A280 प्रमाणांत 2.4 आनी A880/A805 प्रमाण आशिल्ले शोशण वर्णपट 5.8 ते 100 A880 परस चड प्रमाणांत केंद्रीत करात, आनी रोखडेंच तांचो उपेग क्रायो-टीईएम जाळी तयार करपाखातीर वा सांठोवपाखातीर करचो गरज पडमेरेन -80 सॅ.
PufW-His जातींतल्यान विरगळपी पड्डो IMAC बफरांत ( GE Healthcare) 20 मिलिलीटर HisPrep FF Ni-NTA Sepharose स्तंभ (20 mM tris-HCl (pH 8.0) हातूंत 200 mM NaCl आनी 0.03% (w/w)) लायलो. v) β-डीडीएम] हें नांव. स्तंभ पांच सीव्ही आयएमएसी बफरान, आनी उपरांत 10 मिमी.हिस्टिडीन आशिल्ल्या आयएमएसी बफराच्या पांच सीव्हीन धुवन काडलो. कोर संकुल स्तंभांतल्यान 100 मिमी.हिस्टिडीन आशिल्ल्या पांच आयएमएसी बफरांनी विरगळयलो. आरसी-एलएच११४-डब्ल्यू संकुल आशिल्लो अंश अॅमिकॉन १००,००० मेगावॅटॉ फिल्टर (मर्क, ब्रिटन) सज्ज आशिल्ल्या हालयल्ल्या टांकयेंत ~१० मिलिलीटर मेरेन गाळून, बंधन बफरान २० फावटीं पातळ करून उपरांत २५ मिलिलीटर मेरेन घालतात डीईएई सेफारोज स्तंभांत बफराक बांदिल्ले चार सीव्ही आदींच वापरतात. चार सीव्ही बंधन बफरांनी स्तंभ धुवचो, मागीर आठ सीव्हीचेर 0 ते 100 मिमी 4.6 अपूर्णांकापरस चड A880/A805 प्रमाण अॅमिकॉन 100,000 मेगावॅट अपकेंद्रीय फिल्टरांत ~2 मिलिलीटर मेरेन सांद्रीत करून, आदींच 1.5 सीव्ही आयएमएसी भरून बफर समतोल सुपरडेक्स 200 16/600 आकाराच्या वगडावपाच्या स्तंभांत त्याच बफरांत 1.5 से. आकार-वगडावपी अपूर्णांकांचे शोशण वर्णपट एकठांय करून शोशण वर्णपट २.१ परस चड A880/A280 प्रमाण आनी 4.6 ते 100 A880 परस चड A880/A805 प्रमाणांत एकठांय करतात, जे रोखडेंच गोठयल्लें TEM जाळी तयार करपाखातीर वापरतात वा गरज जायमेरेन -80° से.
उण्या तापमानाचे टीईएम जाळी तयार करपाखातीर लायका ईएम जीपी इमर्जन फ्रीझर वापरले. हें संकुल आयएमएसी बफरांत ५० च्या ए८८० मेरेन पातळ करून उपरांत ५μl नव्यान ग्लो-डिस्चार्ज केल्ल्या क्वांटफोइल १.२/१.३ कार्बन लेप आशिल्ल्या तांब्याच्या जाळ्याचेर (Agar Scientific, UK) भारून घेतले. जाळी २० सॅ.तापमानाचेर आनी ६०% सापेक्ष आर्द्रतेचेर ३० से.
आरसी-एलएच११४-डब्ल्यू संकुलाची म्हायती ईबीआयसी (इलॅक्ट्रॉनीक बायोइमेजिंग सेंटर) (ब्रिटीश डायमंड लायट सोर्स) हाचेर टायटन क्रिओस सूक्ष्मदर्शकावरवीं नोंद केल्ली, जी ३०० केव्ही प्रवेग विद्युत्दाबाचेर काम करता, ताची नाममात्र विवर्धन १,३०,०००× आनी ऊर्जा- २० ईव्ही अंतर निवडात. के2 पीक डिटेक्टर आशिल्ल्या गॅटन ९६८ जीआयएफ क्वांटमचो उपेग करून म्हायती एकठांय करपाखातीर काउंटिंग मोडांत प्रतिमा नोंद केल्ली. मापांकीत पिक्सेल आकार 1.048Å, आनी डोस दर 3.83 e-Å-2s-1 आसता. 11 सेकंदां भितर सिनेमा एकठांय करून 40 भागांनी विभागलो. कार्बन लेप आशिल्ल्या वाठाराचो उपेग करून सूक्ष्मदर्शकाक परतून केंद्रीत करचो, आनी मागीर दर बुराकांत तीन सिनेमा एकठांय करात. वट्ट 3130 सिनेमा एकठांय केल्ले, तांचीं डिफोकस मोलां -1 ते -3μm मदीं आशिल्लीं.
आरसी-एलएच११६ संकुलाची म्हायती एस्टरबरी बायोस्ट्रक्चर लॅबोरेटरी (युनिव्हर्सिटी ऑफ लीड्स, ब्रिटन) हांगा ह्याच सूक्ष्मदर्शकाचो उपेग करून एकठांय केल्ली. १३० के. हो सिनेमा 12 सेकंदांत रेकॉर्ड केल्लो आनी ताचे 48 भाग केल्ले. वट्ट ३३५९ फिल्मां एकठांय केल्लीं, तांचीं डिफोकस मोलां -१ ते -३μm मदीं आशिल्लीं.
सगळी डेटा प्रक्रिया रिलियन 3.0 पायपलायनींत (42) जाता. डोस वजन करून तुळयेची गती दुरुस्त करपाखातीर Motioncorr 2 (43) वापरात, आनी मागीर CTF (contrast transfer function) मापदंड थारावपाखातीर CTFFIND 4.1 (44) वापरात. ह्या सुरवातीच्या प्रक्रिया टप्प्यां उपरांतचे खाशेले प्रकाशसूक्ष्मचित्र आकृती 2. S16 त दाखयल्यात. स्वयंचलीत निवड साचा 250 पिक्सेल फ्रेमांतल्या 1000 कणांचो सुमार 250 पिक्सेल हाताळणी करून आनी संदर्भ द्विमात्रिक (2D) वर्गीकरण नाशिल्ल्यान तयार करतात, जाका लागून नमुन्याच्या दूषिततायेक पावपी वा वळखूंक येवपी खाशेलपणां नाशिल्लीं वर्गीकरणां न्हयकारतात. उपरांत सगळ्या सूक्ष्म छायाचित्रांचेर आपोआप निवड केली आनी आरसी-एलएच११४-डब्ल्यू ८४९,३५९ कण आनी आरसी-एलएच११६ संकुलांत ४७६,५४७ कण आशिल्ले. सगळ्या वेंचून काडिल्ल्या कणांक दोन फेरयो संदर्भ नाशिल्लीं 2D वर्गीकरणां केल्यांत आनी दर एका धांवपट्टे उपरांत कार्बन क्षेत्र, नमुन्याचें दूषितपण, स्पश्ट खाशेलपणां नाशिल्लीं वा खरपणान आडखळपी कणांक मेळपी कण न्हयकारतात, जाका लागून 772,033 (90.9%) आनी 359,678 (75.5%) ) कणांचो 3D वर्गीकरणाखातीर वापरतात अनुक्रमान आरसी-एलएच११४-डब्ल्यू आनी आरसी-एलएच११६. सुरवातीचें 3D संदर्भ मॉडेल संयोगात्मक ग्रेडियेंट देंवप पद्दतीचो उपेग करून तयार केलें. सुरवातीच्या मॉडेलाचो संदर्भ म्हूण उपेग करून वेंचून काडिल्ल्या कणांचें 3D च्या चार वर्गांत वर्गीकरण करतात. ह्या वर्गांतल्या मॉडेलाचो संदर्भ म्हणून उपेग करून सगळ्यांत व्हडल्या वर्गांतल्या कणांचेर 3D शुध्दीकरण करचें, मागीर सुरवातीचो 15Å लो-पास फिल्टर वापरून विरय क्षेत्राक आच्छादन करचो, 6 पिक्सेल मृदु कांठां जोडचीं आनी पिक्सेलांचेर उपरांत प्रक्रिया करून वयल्या डिटेक्टराचें गॅटन के2 पीक मॉड्युलेशन ट्रान्सफर फंक्शन दुरुस्त करचें. आरसी-एलएच११४-डब्ल्यू डेटासेटाखातीर मास्काच्या कांठांवयली घट घनताय (यूसीएसएफ काइमेरांतल्या कोर कॉम्प्लेक्स घनतेपसून विच्छेदीत) काडून उडयल्ल्या ह्या सुरवातीच्या मॉडेलांत सुदारणा केल्ली. तातूंतल्यान मेळिल्ले मॉडेल (आरसी-एलएच११४-डब्ल्यू आनी आरसी-एलएच११६ हांचे रिझोल्यूशन अनुक्रमान ३.९१ आनी ४.१६ ए) 3D वर्गीकरणाच्या दुसऱ्या फेरयेखातीर संदर्भ म्हणून वापरतात. वापरिल्ल्या कणांचो सुरवातीच्या 3D वर्गांत गट केल्लो आसता आनी तातूंत शेजारच्या वाठाराकडेन खर परस्परसंबंद नासता. आडखळ वा स्पश्ट संरचनात्मक खाशेलपणांचो उणाव. 3D वर्गीकरणाच्या दुसऱ्या फेरये उपरांत सगळ्यांत चड रिझोल्यूशन आशिल्लो वर्ग वेंचून काडलो [RC-LH114-W खातीर एक वर्ग 377,703 कण (44.5%), RC-LH116 खातीर दोन वर्ग आसात, वट्ट 260,752 कण (54.7%) , जंय ते फकत सुरवातीच्या घुंवपा उपरांत ल्हान फरकान संरेखित केल्यारच सारके आसतात]. वेंचून काडिल्ले कण 400 पिक्सेल पेटींत परतून काडून 3D शुध्दीकरणान परिष्कृत करतात. सुरवातीच्या १५Å लो-पास फिल्टर, ३ पिक्सेल नकाशाचो विस्तार आनी ३ पिक्सेल सॉफ्ट मास्क वापरून विरयण मास्क तयार करतात. दर कणाक सीटीएफ परिष्करण, दर कणाक गती दुरुस्ती आनी दर कणांक सीटीएफ परिष्करणाची दुसरी फेरी वापरून दर एका पांवड्या उपरांत 3D परिष्करण, विरयण मास्किंग आनी उपरांतची प्रक्रिया करून मेळपी पोत आनीक परिष्कृत करतात. ०.१४३ हें एफएससी (फूरियर शेल सहसंबंद गुणांक) कटऑफ मोल वापरून आरसी-एलएच११४-डब्ल्यू आनी आरसी-एलएच११६ हांच्या निमाण्या मॉडेलांचे रिझोल्यूशन अनुक्रमान २.६५ आनी २.८०Å आसतात. निमाण्या मॉडेलाचो एफएससी वक्र आकृती 2. S17 त दाखयला.
सगळे प्रथिन क्रम UniProtKB: LH1-β (PufB; UniProt ID: Q6N9L5) हातूंतल्यान डावनलोड करतात; एलएच१-अॅलॅफा (पुफए; युनिप्रोटआयडी: क्यू६एन९एल४); आरसी-एल (पफएल; युनिप्रोट आयडी: ओ83005); आरसी-एम (पफएम; युनिप्रोट आयडी: ए0ए4झेड7); आरसी-एच (पुहए; युनिप्रोट आयडी: ए0ए4झेड9); प्रथिन-डब्ल्यू (PufW; UniProt ID: Q6N1K3). SWISS-MODEL (45) वापरून आरसीचें समरूपता मॉडेल तयार केलें, तातूंत आरसी-एल, आरसी-एम आनी आरसी-एच हांचे प्रथिन क्रम आनी आरबीएची स्फटिक संरचना आसता. sphaeroides RC हें साचा म्हणून वापरलें (PDB ID: 5LSE) (46). तयार केल्लें मॉडेल नकाशांत (47) फिट करपाक, प्रथिन संरचना सुदारपाक, आनी कोफॅक्टर [4×BChl a (मोनोमर लायब्ररी अवशेश नांव = BCL), 2×BPh a (BPH), एक वा दोन प्रकारचे UQ10 (U10), एक बिगर-हीम लोखण (Fe) आनी एक 3,4-डायहायड्रोहेक्साकार्बोनिलकोलीन करपाक UCSF Chimera हातूंतलें “fit map” साधन वापरात (QAK)] जोडपाक कूट (48) वापरतात. मोनोमर लायब्ररींत QAK उपलब्ध नाशिल्ल्यान PHENIX (49) हातूंतल्या eLBOW साधनाचो उपेग करून ताचें पॅरामीटरीकरण केल्लें.
उपरांत एलएच१ उपखंड तयार केलो. सुरवेक PHENIX (49) हातूंतल्या स्वयंचलीत बांदकाम साधनाचो उपेग करून नकासो आनी LH1-α आनी LH1-β प्रथिन क्रम इनपुट म्हणून वापरून LH1 क्रमाचो एक भाग आपोआप तयार केलो. सगळ्यांत पुराय LH1 उपखंड वेंचून काडून तो काडून कूटांत लोड करचो, तातूंत गळून पडपी क्रम हाताळणी करून जोडचो आनी दोन बीसीएल a (BCL) आनी एक स्पिरिलॉक्सॅन्थिन (CRT) घालचे पयलीं पुराय संरचना हाताळणीन परिष्कृत करची [संबंदीत Rps प्रमाण LH1 संकुलाची घनताय आनी ज्ञात कॅरोटीनॉयड आशय. जाती (17)]. पुराय LH1 उपखंडाची प्रतिलिपी करात, आनी LH1 घनतेच्या लागसारच्या बिगर-मॉडेल वाठारांत डॉक करपाक UCSF काइमेरा “डॉकिंग मॅप साधन” वापरात, आनी मागीर ताका Coot त परिष्कृत करात; सगळ्या LH1 उपखंडांचें मॉडेलिंग जायमेरेन ही प्रक्रिया परतून करची. आरसी-एलएच११४-डब्ल्यू संरचनेखातीर कूटांतली वाटप नाशिल्ली घनताय काडून USCF काइमेरा नकाशांतल्या उरिल्ल्या प्रथिन नाशिल्ल्या घटकांपसून प्रथिनाचे विभागणी करतात आनी सुरवातीचें मॉडेल स्थापन करपाखातीर ऑटोबिल्ड साधनाचो उपेग करतात, आनी उरिल्ले उपखंड (प्रथिन-डब्ल्यू) मॉडेलिंग करतात. PHENIX (49) हातूंत. कूट (48) हातूंतल्या परिणामी मॉडेलांत खंयचेय गळून पडलेले क्रमांक जोडात, आनी मागीर पुराय उपखंड हाताळणीन परिष्कृत करात. उरिल्ली वाटप नाशिल्ली घनताय लिपिड (CDL = CDL, POPC = 6PL आनी POPG = PGT), β-DDM डिटर्जंट (LMT) आनी UQ10 रेणू (U10) हांच्या संयोजनाक बरोबर येता. मॉडेल आंकडेवारी आनी फिटची दृश्य दर्जो आनीक सुदारूंक मेळना मेरेन पुराय सुरवातीच्या मॉडेलाक परिपूर्ण करपाखातीर कूट (48) हातूंत PHENIX ऑप्टिमायझेशन (49) आनी हाताळणी ऑप्टिमायझेशन वापरात. निमाणें, थळावो नकासो धारदार करपाक LocScale (50) वापरात, आनी मागीर वाटप नाशिल्ल्या घनतेचें मॉडेलिंग आनी स्वयंचलीत आनी हाताळणी ऑप्टिमायझेशनाचे हेर जायते चक्र करात.
तांच्या तांच्या घनतेभितर गोदींत आशिल्ले तांचे पॅप्टायड, कोफॅक्टर आनी हेर लिपिड आनी क्विनोन आकृती 1 आनी 2. S18 ते S23 हातूंत दाखयल्यात. निमाण्या मॉडेलाची सांख्यिकी म्हायती कोश्टक S1 त दाखयल्या.
हेर तरेन सांगले बगर UV/Vis/NIR शोशण वर्णपट कॅरी60 वर्णपट प्रकाशमापकाचेर (Agilent, USA) 250 nm ते 1000 nm ह्या अंतराचेर 1 nm अंतराचेर आनी 0.1s च्या एकीकरण काळांत एकठांय केल्ले.
नमुनो क्वार्ट्ज क्युव्हेटांत १ च्या A८८० मेरेन २ मिमी. वर्तुळाकार द्विवर्णीय वर्णपट जास्को ८१० वर्णपटध्रुवमापकाचेर (जास्को, जपान) ४०० एनएम ते ९५० एनएम हांचेमदल्या १ एनएम अंतराचेर २० एनएम मिनिट-१ ह्या स्कॅन दरान एकठांय केल्ले.
कोर संकुल सुमार ५० च्या A880 मेरेन पातळ करून मोल विलोपन गुणांक थारायतात.10μl खंड 990μl बंधन बफर वा मेथॅनॉलांत पातळ करतात आनी BChl विघटन उणें करपाखातीर शोशण वर्णपट रोखडेंच एकठांय करतात. दर एका मेथॅनॉल नमुन्यांतलें बीसीएचएल प्रमाण 54.8 मिमी.-1 सेंमी.-1 ह्या 771 एनएम हांगाच्या विलोपन गुणांकान मेजलें आनी विलोपन गुणांक थारायलें (51). मेजपाची BChl सांद्रताय 32 (RC-LH114-W) वा 36 (RC-LH116) अशी विभागून कोर संकुल सांद्रताय थारायतात, उपरांत ताचो उपेग बफर विलोपन गुणांकांत एकठांय केल्ल्या त्याच नमुन्याचें शोशण वर्णपट थारावपाखातीर करतात. समांतर. दर एका नमुन्याखातीर तीन परत परत माप घेतले आनी BChl Qy चडांत चड सरासरी शोशणक्षमताय गणनेखातीर वापरली. ८७८ एनएम.
(५२) हातूंतले पद्दतीप्रमाण यूक्यू१० प्रमाण थारायलें. थोडयाच उतरांनी एजिलेंट १२०० एचपीएलसी पद्दत वापरून रिव्हर्स फेज एचपीएलसी (आरपी-एचपीएलसी) केल्ली. ०.०२% (वजन/आकार) फेरिक क्लोरायड आशिल्ल्या ५०:५० मेथॅनॉल:क्लोरोफॉर्मांत सुमार ०.०२ एनएमओएल आरसी-एलएच११६ वा आरसी-एलएच११४-डब्ल्यू विरगळोवन, पूर्वसमतोल केल्लें बेकमन कल्टर अल्ट्रास्फीयर ओडीएस ४.६ मिमी.एचपीएलसींत ४० सॅ ×25 सेंमी. एचपीएलसी विरयणांत 275 एनएम (UQ10), 450 एनएम (कॅरोटीनॉयड) आनी 780 एनएम (BChl) हांगा शोशणक्षमताय 1 वरां निरिक्षण करपाखातीर समक्रांतिक इल्युशन करचें. २५.५ मिनटांनी २७५ एनएम वर्णपटलेखनांतलें शिखर एकठांय केल्लें, तातूंत हेर कसलेंच सोदून काडपाक येवपी संयुग नाशिल्लें. एकत्रीत क्षेत्रफळाचो उपेग ० ते ५.८ एनएमओएल मेरेन शुध्द मानकांच्या इंजेक्शनापसून मेजपाच्या मापांकन वक्राच्या संदर्भांत काडिल्ल्या UQ10 चें मोलाचें प्रमाण मेजपाखातीर करतात (आकृती S14). दर एका नमुन्याचें तीन प्रतिकृतींनी विश्लेशण केलें आनी कळयल्ली चूक सरासरीच्या एसडी कडेन जुळटा.
चडांत चड ०.१ क्यूय शोशण आशिल्लें आरसी-एलएच१ संकुल आशिल्लें विरय ३० मायक्रोमोल उणें केल्ल्या घोड्याच्या काळजाच्या सायटोक्रोम c2 (मर्क, ब्रिटन) आनी ० ते ५० मायक्रोएमयूक्यू२ (मर्क, ब्रिटन) हांणी तयार केलें. दर एका UQ2 सांद्रतायेचेर तीन १ मिलिलीटर नमुने तयार करून मेजचेपयलीं काळखांत पुरायपणान जुळोवपाची खात्री करपाखातीर ४ सॅ.तापमानाचेर काळखांत रातभर उब्यो दवरल्यो. हें विरय ३०० एनएम ज्वाला/५०० लायन जाळी, १.२४ मिमी.चो प्रवेश, ०.१२ मिमी.मध्य आनी ०.६ मिमी.च्या निर्गम स्लिटांनी सज्ज आशिल्ल्या ओलिस आरएसएम१००० मॉड्यूलर स्पॅक्ट्रोफोटोमीटरांत भरलो. उत्तेजन उजवाड वगडावपाखातीर नमुन्याच्या प्रकाशनळयेच्या आनी संदर्भ प्रकाशगुणाकार नळयेच्या प्रवेशदाराचेर ६०० एनएम लांब पास फिल्टर दवरतात. 0.15 सेकंद एकीकरण काळ घेवन 550 एनएमचेर शोशणक्षमताय निरिक्षण केलें. ८८० एनएम एम८८०एफ२ एलईडी (लाइट इमिटिंग डायोड) (थॉरलॅब्स लिमिटेड, युके) कडल्यान फायबर ऑप्टिक केबलांतल्यान डीसी२२०० नियंत्रकावरवीं (थॉरलॅब्स लिमिटेड, ब्रिटन) ९०% तीव्रतेचेर उत्तेजन उजवाड भायर सरता आनी उजवाडाच्या स्त्रोताक ९०° कोनांत उत्सर्जीत जाता. सुरवेक नमुन्याक शोशून घेवंक नाशिल्लो खंयचोय उजवाड परत करपाखातीर मेजपाचो तुळो आरशाक विरोध करता. 50 सेकंद प्रकाश जावचे पयलीं 10 सेकंद शोशणक्षमताय नदर दवरची. उपरांत काळखांत 60 s शोशणक्षमताय फुडें निरिक्षण करून क्विनोलोल आपशींच सायटोक्रोम c23 + कितले मेरेन उणें करता हाचें मुल्यांकन केलें (कच्चो म्हायती खातीर आकृती S8 पळयात).
०.५ ते १० सेकंदांभितर (UQ2 सांद्रतायेचेर आदारून) रेखीव सुरवातीचो दर फिट करून आनी दर एका UQ2 सांद्रतायेचेर तिनूय नमुन्यांचे दर सरासरी करून डेटाचेर प्रक्रिया केली. त्या त्या विलोपन गुणांकान गणीत केल्ल्या आरसी-एलएच१ सांद्रतायेचो उपेग करून दराचें उत्प्रेरक कार्यक्षमतायांत रुपांतर केलें, तें ऑरिजिन प्रो २०१९ (ओरिजिनलॅब, अमेरिकेचीं संयुक्त संस्थानां) हातूंत प्लॉट केल्लें आनी मायकेलीस-मेन्टेन मॉडेलांत फिट करून दिसपी किमी आनी केसीएटी मोलां थारायलीं.
क्षणिक शोशण मापनाखातीर आरसी-एलएच१ नमुनो ५० मिमी.सोडियम अॅस्कॉर्बेट (मर्क, अमेरिकेचीं संयुक्त संस्थानां) आनी ०.४ मिमी.टर्बुटीन (मर्क, अमेरिकेचीं संयुक्त संस्थानां) आशिल्ल्या आयएमएसी बफरांत ~२μM मेरेन पातळ केलो. अॅस्कॉर्बिक आम्ल बळी दिवपी इलॅक्ट्रॉन दाता म्हणून वापरतात आनी पुराय माप प्रक्रियेंत मुखेल आरसी दाता उणो उरचो (म्हळ्यार प्रकाशऑक्सिडीभवन जावंक ना) हाची खात्री करपाखातीर टर्ट-ब्युटाक्लोफेन क्यूबी प्रतिबंधक म्हणून वापरतात. लेसर मार्गांतल्या नमुन्याक उत्तेजन नाडींमदीं काळखांतल्या अनुकूलनाखातीर फावो तो वेळ मेळचो हे खातीर २ मिमी. ~100-fs लेसर स्पंद वापरून Ti: Sapphire लेसर प्रणाली (Spectra Physics, USA) प्रवर्धन करून नमुनो 880 nm चेर 1 kHz (NIR खातीर 20 nJ वा Vis खातीर 100 nJ) पुनरावृत्ती दरान उत्तेजीत करचो. डेटा एकठांय करचे पयलीं नमुनो सुमार 30 मिनटां उत्तेजन उजवाडाक दवरचो. संपर्कांत आयल्यार क्यूए निश्क्रीय जातलो (कदाचित एक वा दोन फावटीं क्यूए उणो जातलो). पूण उपकार करून लक्षांत दवरात की ही प्रक्रिया उलटपासारकी आसा कारण काळखांतल्या अनुकूलनाच्या लांब काळा उपरांत आरसी ल्हवू ल्हवू क्यूए कार्यावळींत परत येतलो. -१० ते ७००० पीएस ह्या विलंब काळावांगडा क्षणिक वर्णपट मेजपाखातीर हेलियोस वर्णपटमापक (अल्ट्राफास्ट सिस्टम्स, अमेरिकेचीं संयुक्त संस्थानां) वापरलें. डेटा संच विघटन करपाक, मागीर विलीन करपाक आनी प्रमाणीत करपाक Surface Xplorer सॉफ्टवॅर (Ultrafast Systems, USA) वापरात. क्षय संबंदीत विभेदक वर्णपट मेळोवपाखातीर एकत्रीत डेटा संच वापरपाखातीर CarpetView सॉफ्टवेअर पॅकेज (Light Conversion Ltd., Lithuania) वापरात वा Origin (OriginLab, USA) हातूंतल्या एक तरंगलांबाय वर्णपटीय उत्क्रांतीकडेन जुळोवपाखातीर साधन प्रतिसादावांगडा जायत्या घातांकांक घुंवडावपी कार्य वापरात.
वयर सांगिल्लेप्रमाण (५३) आरसी आनी परिधीय एलएच२ ह्या दोनूय एंटीना नाशिल्लो एलएच१ संकुल आशिल्लो प्रकाशसंश्लेशण पटल तयार केलो. पड्डो २० मिमी.ट्रायस (पीएच ८.०) हातूंत पातळ करून उपरांत २ मिमी. -१० ते ७००० पीएस विलंब काळान ५४० एनएमचेर नमुनो उत्तेजीत करपाखातीर ३०एनजे लेसर स्पंदन वापरलो. Rps खातीर वर्णीत केल्ल्या प्रमाणें डेटा संच प्रक्रिया करात. पाल नमुनो.
पड्ड्याक ४ सॅ. 2% (w/v) β-DDM हातूंत 4 सॅ.तापमानाचेर काळखांत 1 वरां ल्हवू ल्हवू हालोवन पड्डो विरगळचो. नमुनो १०० मिमी.ट्रायइथिलअमोनियम कार्बोनेट (पीएच ८.०) (टीईएबी; मर्क, युके) हातूंत २.५ मिग्रॅ मिलिलीटर-१ (बायो-रॅड विश्लेशण) प्रथिन सांद्रतायेन पातळ केलो. आदीं उजवाडाक आयिल्ले पद्दतींतल्यान (54) फुडली प्रक्रिया केली, 50 μg प्रथिनां पातळ करून वट्ट 50 μl TEAB हातूंत 1% (w/v) सोडियम लॉरेट (Merck, UK) आशिल्ल्या TEAB हातूंत पातळ करून सुरवात केली. 60 s सोनिकेशन केल्या उपरांत 5 mM tris(2-carboxyethyl)phosphine (Merck, UK) च्या आदारान 37° से.चेर 30 मिनटां उणें केलें. एस-आल्किलीकरणाखातीर नमुनो १० मिमी.मिथिल एस-मिथिलथिओमेथेनसल्फोनेट (मर्क, ब्रिटन) हातूंत उब्या करून २०० मिमी.आयसोप्रोपानोल स्टॉक विरयांतल्यान १० मिनटां कोठारांतल्या तापमानांत घालचो. २ μg ट्रिप्सिन/एन्डोप्रोटीनेज Lys-C मिश्रण (Promega UK) घालून ३७ सॅ.तापमानाचेर ३ वरां दवरून प्रोटीओलायटीक पचन केलें. ५० μl इथिल ऍसिटेट आनी १० μl १०% (v/v) एलसी ग्रेड ट्रायफ्लुओरोएसिटिक आम्ल (TFA; Thermo Fisher Scientific, UK) घालून ६० सेकंद भंवर करून लॉरेट पृश्ठक्रियाकारक काडून घेतलें. १५,७०० आरसीएफचेर ५ मिनटां अपक्षेपण करून फेज वेगळेपणाक चालना दिली. निर्मात्याच्या नेमाप्रमाण पॅप्टायड आशिल्ल्या सकयल्या टप्प्याक काळजीपूर्वक आस्पिरेट करून मीठ काडपाखातीर C18 स्पिन स्तंभ (Thermo Fisher Scientific, UK) वापरलो. निर्वात अपक्षेपणावरवीं सुकयल्या उपरांत नमुनो ०.५% टीएफए आनी ३% एसीटोनायट्रायलांत विरगळयलो आनी पयलीं तपशीलवार सांगिल्ल्या प्रणालीच्या मापदंडांचो उपेग करून नॅनोफ्लो आरपी वर्णपटलेखन पद्दतीन जोडिल्ल्या द्रव्यमान वर्णपटमापन पद्दतीन ५०० एनजी विश्लेशण केलें.
Rps सोदपाखातीर प्रथिन वळख आनी प्रमाणीकरणाखातीर MaxQuant v.1.5.3.30 (56) वापरात. पॅलुस्ट्रिस प्रोटीओम डेटाबेस (www.uniprot.org/proteomes/UP000001426). द्रव्यमान वर्णपटमापन प्रोटीओमिक्स डेटा डेटासेट वळखपी PXD020402 खाला PRIDE भागीदार रिपॉझिटरी (http://proteomecentral.proteomexchange.org) वरवीं ProteomeXchange Alliance हातूंत जमा केला.
इलॅक्ट्रोस्प्रे आयनीकरण द्रव्यमान वर्णपटमापनासयत आरपीएलसी पद्दतीन विश्लेशणाखातीर रानटी प्रकारच्या आरपीएसांतल्यान आरसी-एलएच१ संयुग तयार केलें. आदीं उजवाडाक आयिल्ले पद्दतीचो उपेग करून (16) पॅलुस्ट्रिस पेशींत तयार जावपी प्रथिनांची सांद्रताय 20 मिमी.हेपेस (पीएच 7.8), 100 मिमी. निर्मात्याच्या नेमाप्रमाण 2D शुध्दीकरण किट (GE Healthcare, USA) वापरून अवक्षेपण पद्दतीन 10 μg प्रथिन काडप, आनी अवक्षेप 20 μl 60% (v / v) फॉर्मिक आम्ल (FA), 20% (v / v) एसीटोनायट्रायल आनी 20% (v/v) उदकांत विरगळोवप. पांच मायक्रोलिटरांचें आरपीएलसी (डायोनेक्स आरएसएलसी) आनी द्रव्यमान वर्णपटमापन (Maxis UHR-TOF, Bruker) हांचेवांगडा जोडिल्लें विश्लेशण केलें. 60° से आनी 100μlmin -1 तापमानांत वेगळे करपाखातीर MabPac 1.2×100 मिमी [90%(v/v) एसीटोनायट्रायल टीएफएंत 0.1%(v/v) FA आनी 0.02%(v/v)] मानक विद्युत् फवारणी आयनीकरण स्त्रोत आनी मुलभूत मापदंड वापरून 60 मिनटां परस चड वेळ द्रव्यमान वर्णपटमापकाक 100 ते 2750 मी/झ (द्रव्यमान-आभार प्रमाण) मेळटा. ExPASy जैवमाहितीशास्त्र संसाधन पोर्टल FindPept साधनाच्या आदारान (https://web.expasy.org/findpept/), द्रव्यमान वर्णपटाचे नकाशे संकुलाच्या उपखंडांक नकाशे तयार करात.
100 मिलिलीटर एनएफ-उण्या (10μMm-2 s-1), मध्यम (30μMm-2 s-1) वा चड (300μMm-2 s-1) उजवाडाखाला पेशींची वाड 72 वरां केल्ली. एम२२ माध्यम (एम२२ माध्यम जातूंत अमोनियम सल्फेट सोडून सोडियम सक्सिनेट बदलून सोडियम ऍसिटेट घालतात) १०० मिलिलीटर स्क्रू-टॉप बाटलेंत (२३). पांच ३० सेकंद चक्रांत ०.१ मायक्रोन कंवचेच्या मणींक १:१ खंडाच्या प्रमाणांत मणी घालून पेशींचें विघटन करून बर्फाचेर ५ मिनटां थंड केलें. अविलायनी पदार्थ, अखंड पेशी आनी कंवचेचे मणी बेंचटॉप मायक्रोसेंट्रीफ्यूजांत 16,000 आरसीएफचेर 10 मिनटां अपक्षेपण करून काडून उडयले. पड्डो Ti 70.1 रोटरांत 20 mM tris-HCl (pH 8.0) हातूंत 100,000 RCF आशिल्ल्या 40/15% (w/w) सुक्रोज ग्रेडियेंटांत 10 वरां वेगळो केलो.
आमच्या आदल्या वावरांत वर्णन केल्लेप्रमाण PufW (16) चेर His टॅगाचें इम्युनोडिटेक्शन. थोडयाच उतरांनी सांगपाचें जाल्यार शुध्द कोर संकुल (11.8 nM) वा 2x SDS लोडिंग बफरांत (Merck, UK) आरसीची समान सांद्रताय आशिल्ली पड्डो (उणें केल्लो फरक वर्णपट वजा करून ऑक्सिडीभवनावरवीं थारायतात आनी रंगीत जेलाचेर आशिल्ल्या भाराक जुळोवन घेतात) दोन फावटीं पातळ करतात. प्रथिनां 12% बिस्-ट्रिस नुपेज जेल (Thermo Fisher Scientific, UK) ह्या प्रतिकृतीचेर वेगळीं केल्लीं. आरसी-एल उपखंडाक लोड आनी दृश्टीकोन करपाखातीर एक जेल कूमासी ब्रिलियंट ब्लू (बायो-रॅड, ब्रिटन) रंगान रंगयले. दुसर् या जेलाचेर आशिल्लें प्रथिन प्रतिकारशक्ती परीक्षेखातीर मेथॅनॉल सक्रिय केल्ल्या पॉलीव्हिनिलिडीन फ्लोराइड (PVDF) पड्ड्यांत (Thermo Fisher Scientific, UK) हस्तांतरीत केलें. पीव्हीडीएफ पड्डो ५० मिमी. १५० मिमी.NaCl आनी ०.०५% (v/v) ट्वीन-२०] १:१००० ए१९०-११४ए, बेथिल लॅबोरेटरीज, अमेरिकेंत) ४ वरां. प्रतिपिंड बफरांत 3 फावटीं धुवन उपरांत पड्ड्याक हॉर्सरेडीश पेरॉक्सिडेज (सिग्मा-आल्ड्रिच, ब्रिटन) अँटी-मुयाच्या दुय्यम प्रतिपिंड (प्रतिपिंड बफरांत 1:10,000 पातळ केल्लें) WESTAR ETA C 2.0 रसायनप्रकाश सबस्ट्रेट वापरून सोदून काडपाक मेळचें म्हणून उबें केलें (प्रतिपिंड बफरांत 3 धुंवल्या उपरांत 5 मिनटां). (सायनाजन, इटली) आनी अमेरशॅम इमेजर 600 (जीई हेल्थकेअर, ब्रिटन) हीं वखदां तयार करतात.
दर एका रंगीत जेल वा प्रतिरक्षी परीक्षण लेनाचे तीव्रता वितरण काडून, शिखराच्या सकयल आशिल्लो वाठार एकठांय करून आनी आरसी-एल (रंगीत जेल) आनी प्रथिन-डब्ल्यू (प्रतिरक्षी परीक्षण) हांचे तीव्रता प्रमाण मेजून, इमेजजे (57) हातूंत प्रतिमेचेर प्रक्रिया करात. शुध्द आरसी-एलएच११४-डब्ल्यू नमुन्यांत आरसी-एल आनी प्रथिन-डब्ल्यू हांचें प्रमाण १:१ अशें मानून आनी ते प्रमाण पुराय डेटा संच सामान्य करून ह्या प्रमाणांचें मोल प्रमाणांत रुपांतर केलें.
ह्या लेखा खातीर पूरक साहित्या खातीर, उपकार करून पळयात http://advances.sciencemag.org/cgi/content/full/7/3/eabe2631/DC1
हो क्रिएटिव्ह कॉमन्स एट्रिब्यूशन परवान्याच्या नेमा खाला वितरीत केल्लो मुक्त प्रवेश लेख आसा. लेखांत मूळ ग्रंथाचो योग्य उल्लेख केल्यार खंयच्याय माध्यमांत अनिर्बंध वापर, वितरण आनी पुनरुत्पादन करपाक मेळटा.
टिप: आमी तुमकां फकत तुमचो ईमेल पत्तो दिवपाक सांगतात, जाका लागून तुमी पानाचेर शिफारस करतात त्या मनशाक तुमकां ईमेल पळोवंक जाय आनी तो स्पॅम न्हय हें कळटलें. आमी खंयचेच ईमेल पत्ते कॅप्चर करचे नात.
तुमी भेटीदार आसात काय ना हाची चांचणी करपाक आनी आपोआप स्पॅम सादर करपाक आडावपाक हो प्रस्न वापरतात.
डेव्हिड जे.के.स्वेन्सबरी, पार्क कियान, फिलीप जे.जॅक्सन, केटलीन एम.फॅरीस, डारियस एम.निडझविडस्की, एलिझाबेथ सी.मार्टिन, डेव्हिड ए.फार्मर, लोर्ना ए.मॅलोन, रेबेका एफ.थॉम्पसन, नील ए.रॅन्सन, डॅनियल पी.कॅनिफ , मार्क जे.डिकमन, डेवी होल्टन, क्रिस्टीन किर्मायर, अँड्र्यू हिचकॉक, सी
विक्रिया केंद्रांतल्या उजवाडाचो सापळो १ संकुलाची उच्च रिझोल्यूशन संरचनेवरवीं क्विनोन गतीविज्ञानाची नवी म्हायती मेळटा.
डेव्हिड जे.के.स्वेन्सबरी, पार्क कियान, फिलीप जे.जॅक्सन, केटलीन एम.फॅरीस, डारियस एम.निडझविडस्की, एलिझाबेथ सी.मार्टिन, डेव्हिड ए.फार्मर, लोर्ना ए.मॅलोन, रेबेका एफ.थॉम्पसन, नील ए.रॅन्सन, डॅनियल पी.कॅनिफ , मार्क जे.डिकमन, डेवी होल्टन, क्रिस्टीन किर्मायर, अँड्र्यू हिचकॉक, सी
विक्रिया केंद्रांतल्या उजवाडाचो सापळो १ संकुलाची उच्च रिझोल्यूशन संरचनेवरवीं क्विनोन गतीविज्ञानाची नवी म्हायती मेळटा.
©2021 अमेरिकन असोसिएशन फॉर द अॅडव्हान्समेंट ऑफ सायन्स. सगळे हक्क राखीव आसात. एएएएस हिनारी, अगोरा, ओआरे, कोरस, क्लॉकएसएस, क्रॉसरेफ आनी काउंटर हांचो भागीदार आसा. सायन्सएडव्हान्सेस आयएसएन 2375-2548.