लेख “रोगजंतू आनी कीटकांक प्रतिकारशक्ती सुदारप” ह्या संशोधन विशयाचे भाग आसा, सगळे 5 लेख पळयात
बुरशीच्या वनस्पती रोगाच्या क्षयरोगाचें कारणीभूत घटक स्क्लेरोटिनिया स्क्लेरोटिओरम (Lib.) डी बॅरी वेगवेगळ्या यजमान वनस्पतींक संसर्ग करपाखातीर बहुस्तरीय रणनिती वापरता. ह्या अभ्यासांत स्यूडोमोनास स्क्लेरोटिओरम हाका लागून जावपी धव्या साच्याक फॅसिओलस व्हल्गेरिस एल. एल-ओर्निथिनान एस. तशेंच, हरितगृह परिस्थितींत धव्या मोल्डाची खरसाण खूब उणी जावंक शकता. तेभायर एल-ओर्निथिनान उपचार केल्ल्या वनस्पतींची वाड उत्तेजीत केल्ल्यान एल-ओर्निथिनाची चांचणी केल्ली सांद्रताय उपचार केल्ल्या वनस्पतींखातीर वनस्पत विखारी नाशिल्ली अशें दिसून येता. तेभायर एल-ओर्निथिनान बिगर एन्झायमीक अँटीऑक्सिडेंट (एकूण विरगळपी फिनोलिक आनी फ्लॅव्होनॉयड) आनी एन्झायमीक अँटीऑक्सिडेंट (कॅटालेज (CAT), पेरॉक्सिडेज (POX), आनी पॉलीफेनोल ऑक्सिडेज (PPO) हांची अभिव्यक्ती वाडयली आनी तीन अँटीऑक्सिडेंट संबंदीत जनुकांची (PvCAT1, PvSOD, आनी PvGR) अभिव्यक्ती वाडयली. तेभायर सिलिको विश्लेशणावरवीं एस. (PlOAH) कार्यात्मक विश्लेशण, संरक्षित डोमेन आनी टोपोलॉजी हांच्या नदरेन. मजेची गजाल म्हळ्यार बटाटाच्या डेक्स्ट्रोज ब्रोथ (PDB) माध्यमांत एल-ओर्निथिन घालून एस. तेच प्रमाण एल-ओर्निथिनाचो बाह्यजनन वापर केल्ल्यान उपचार केल्ल्या वनस्पतींपसून एकठांय केल्ल्या बुरशीच्या मायसेलियमांत SsOAH जनुकाची अभिव्यक्ती खूब उणी जाली. निमाणें एल-ऑर्निथिन वापरल्यार पीडीबी माध्यमांत आनी संसर्गजन्य पानांनी ऑक्सॅलिक आम्लाचे स्राव खूब उणो जालो. निमाणें सांगपाचें जाल्यार रेडॉक्स स्थिती तिगोवन दवरपाक तशेंच संसर्गजन्य वनस्पतींचो संरक्षण प्रतिसाद वाडोवपाक एल-ऑर्निथिनाची मुखेल भुमिका आसता. ह्या अभ्यासाचे परिणाम धव्या मोल्डाचेर नियंत्रण दवरपाखातीर आनी कणंगांच्या उत्पादनाचेर आनी हेर पिकांचेर ताचो परिणाम उणो करपाखातीर अभिनव, पर्यावरणाक अनुकूल पद्दती तयार करपाक मदत करूंक शकतात.
स्क्लेरोटिनिया स्क्लेरोटिओरम (Lib.) डी बॅरी ह्या क्षयरोगी बुरशीक लागून जावपी धवो सांच हो एक विध्वंसक, उत्पन्न उणो करपी रोग आसून संवसारीक कणंग (Phaseolus vulgaris L.) उत्पादनाक गंभीर धोको निर्माण जाता (Bolton et al., 2006). स्क्लेरोटिनिया स्क्लेरोटिओरम हो जमनींतल्यान येवपी बुरशीच्या वनस्पती रोगजंतूंतलो एक कठीण नियंत्रण, 600 परस चड वनस्पती जातींचो व्यापक यजमान श्रेणी आनी यजमान ऊतकांक अविशिश्ट पद्दतीन बेगीन मॅसेरेट करपाची तांक (Liang and Rollins, 2018). प्रतिकूल परिस्थितींत तो आपल्या जिवीत चक्राचो गंभीर टप्पो घेवन जमनींत काळो, कठीण, बियांसारको रचणूक म्हणून वा संसर्गजन्य वनस्पतीच्या मायसेलियम वा कांड पिथांत धवी, फुलपी वाड म्हणून चड काळ सुप्त उरता (Schwartz et al., 2005). एस. स्क्लेरोटिया पोशक तत्वांनी भरपूर आसतात, जमनींत चड काळ तिगून उरूंक शकतात आनी उपरांतच्या संसर्गाखातीर मुखेल टीका म्हूण काम करतात (Schwartz et al., 2005). अनुकूल परिस्थितींत स्क्लेरोटिया अंकुरीत जावन हवेंतल्यान बीजां तयार जातात आनी वनस्पतीच्या जमनीवयल्या सगळ्या भागांक संसर्ग जावंक शकता, तातूंत फुलां, कांड वा फळां हांचो आस्पाव जाता (Schwartz et al., 2005).
स्क्लेरोटिनिया स्क्लेरोटिओरम आपल्या यजमान वनस्पतींक संसर्ग करपाखातीर बहुस्तरीय रणनितीचो उपेग करता, तातूंत स्क्लेरोटियाच्या अंकुरणासावन लक्षणां तयार जावपामेरेनच्या समन्वयात्मक घडणुकांची माळ आसता. सुरवेक एस. उपरांत बुरशी ऑक्सॅलिक आम्ल हें विषाणूजन्य घटक स्रावीत करून वनस्पतीच्या कोशिका वण्टीच्या पीएच नियंत्रीत करता, एन्झायमीक विघटन आनी ऊतक आक्रमणाक चालना दिता (Hegedus and Rimmer, 2005) आनी यजमान वनस्पतीचो ऑक्सिडीभवन स्फोट दामता. ही अम्लीकरण प्रक्रिया वनस्पतीची कोशिका वण्टी दुबळी करता, जाका लागून बुरशीची कोशिका वण्टी विघटन करपी एंझायम (CWDEs) हांच्या सामान्य आनी कार्यक्षम कार्याखातीर अनुकूल वातावरण मेळटा, जाका लागून रोगजंतू भौतिक आडखळ पयस करून यजमानाच्या ऊतकांत भितर सरूंक शकता (Marciano et al., 1983). एकदां भितर सरतकच एस. घाय आनी हायफाल चटयेची वाड जाल्ल्यान धव्या मोल्डाचीं खाशेलीं लक्षणां दिसतात (Hegedus and Rimmer, 2005). मजगतीं, यजमान वनस्पत नमुनो वळखपी ग्राही (PRRs) वरवीं रोगजंतू संबंदीत आणवीय नमुन्यांची (PAMPs) वळखतात, जाका लागून संकेत घडणुकांची माळ सुरू जाता आनी निमाणें संरक्षण प्रतिसाद सक्रिय जातात.
दशकां सावन रोग नियंत्रणाचे यत्न जाले तरी हेर वेपारी पिकांभशेन कणंगांतय रोगजंतूक प्रतिकारशक्ती, जिवीत आनी अनुकूलताय हांचेखातीर फावो त्या प्रमाणांत प्रतिरोधक जंतूप्लाझ्माचो उणाव उरता. देखून रोग वेवस्थापन अत्यंत आव्हानात्मक आसा आनी ताका एक एकत्रीत, बहुआयामी रणनिती जाय पडटा, जातूंत संस्कृतीक पद्दती, जैविक नियंत्रण आनी रसायनीक कवकनाशकांचो मेळ आसपावता (O’Sullivan et al., 2021). धव्या मोल्डाचेर रसायनीक नियंत्रण सगळ्यांत प्रभावी आसता कारण कवकनाशकां योग्य रितीन आनी योग्य वेळार दिल्यार रोगाच्या प्रसाराचेर प्रभावीपणान नियंत्रण दवरूं येता, संसर्गाची तीव्रता उणी जाता आनी उत्पन्न उणें जाता. पूण कवकनाशकांचो चड वापर आनी चड भर दिल्ल्यान एस. देखून पर्यावरणाक अनुकूल अशे पर्याय सोदप हें मुखेल प्राधान्य जालां.
पुट्रेसीन, स्पर्मिडीन, स्पर्माइन, आनी कॅडाव्हेरिन सारकिले पॉलियामायन (PAs) जमनींतल्यान जावपी वनस्पती रोगजंतूंआड आशादायक पर्याय म्हणून काम करूंक शकतात, जाका लागून धोकादायक रसायनीक कवकनाशकांचो वापर पुरायपणान वा अंशतः उणो जाता (Nehela et al., 2024; Yi et al., 2024). उंचेल्या वनस्पतींनी, पीए जायत्या शारिरीक प्रक्रियांनी वांटो घेतात, तातूंत पेशी विभाजन, भेद, आनी अजैवीक आनी जैव ताणांत प्रतिसाद हांचो आस्पाव जाता (Killiny and Nehela, 2020). ते अँटीऑक्सिडेंट म्हणून काम करूंक शकतात, प्रतिक्रियाशील ऑक्सिजन जाती (ROS) स्कॅव्हेंज करपाक मदत करूंक शकतात, रेडॉक्स होमियोस्टॅसिस सांबाळूंक शकतात (Nehela and Killiny, 2023), संरक्षण संबंदीत जीन प्रेरीत करूंक शकतात (Romero et al., 2018), वेगवेगळ्या चयापचयाचे मार्ग नियंत्रीत करूंक शकतात (Nehela and Killiny, 2023), अंतर्निहित फायटोहार्मोनांचें संयोजन करूंक शकतात (Nehela and Killiny, 2023 2019), प्रणालीगत संपादीत प्रतिकार (SAR) स्थापन करतात, आनी वनस्पत-रोगजंतू परस्पर क्रिया नियंत्रीत करतात (Nehela and Killiny, 2020; Asija et al., 2022; Czerwoniec, 2022). वनस्पतींच्या संरक्षणांत पीए हांची विशिश्ट यंत्रणा आनी भुमिका वनस्पती जाती, रोगजंतू आनी पर्यावरणीय परिस्थितीप्रमाण वेगवेगळी आसता हें लक्षांत घेवपासारकें आसा. वनस्पतींनी सगळ्यांत चड प्रमाणांत आशिल्लो पीए गरजेच्या पॉलीअमायन एल-ओर्निथिनांतल्यान जैवसंश्लेशण जाता (Killiny and Nehela, 2020).
वनस्पतीची वाड आनी विकासांत एल-ऑर्निथिनाची जायती भुमिका आसता. देखीक, आदल्या अभ्यासांतल्यान दिसून आयलां की तांदळांत (Oryza sativa) ऑर्निथिनाचो संबंद नायट्रोजन रिसायकल (Liu et al., 2018), तांदळाचें उत्पन्न, दर्जो आनी सुगंध (Lu et al., 2020), आनी उदकाच्या ताण प्रतिसादाकडेन (Yang et al., 2000) आसूं येता. ते भायर एल-ओर्निथिनाचो बाह्यजनन वापर केल्ल्यान साकर बीट (Beta vulgaris) (Hussein et al., 2019) हातूंत दुकळ सोंसपाची तांक खूब वाडली आनी कांदो (Allium Cepa) (Çavuşoǧlu and Çavuşoǧlu, 2021) आनी काजू (Anacardium occidentale) हातूंत मीठाचो ताण उणो जालो. वनस्पत (दा रोचा आनी हेर, 2012). अजैवीक ताण संरक्षणांत एल-ओर्निथिनाची संभाव्य भुमिका उपचार केल्ल्या वनस्पतींनी प्रोलीन संचय करपाक ताचो वांटो आशिल्ल्यान आसूं येता. देखीक- प्रोलीन चयापचयाकडेन संबंदीत आशिल्लीं जंतू, जशीं ऑर्निथिन डेल्टा अॅमिनोट्रांसफॅरेज (डेल्टा-ओएटी) आनी प्रोलीन डिहायड्रोजनेज (ProDH1 आनी ProDH2) जंतू, निकोटिआना बेंथॅमियाना आनी अरबीडोप्सिस थॅलियाना हांच्या यजमान नाशिल्ल्या स्युडोमोनास सिरिंज जातींआड (सेंथिल-कुमार आनी म्हैसूर, 2012). दुसरे वटेन रोगजंतू वाडपाखातीर बुरशीचें ऑर्निथिन डिकार्बोक्झीलेज (ODC) गरजेचें आसता (Singh et al., 2020). फ्युझेरियम ऑक्सिस्पोरम च्या ओडीसीक लक्ष्य करप च. एसपी. lycopersici via host-induced gene silencing (HIGS) हाका लागून टोमॅटोच्या झाडांचो फ्युझेरियम विल्टाक प्रतिकार करपाक खूब वाड जाली (Singh et al., 2020). पूण वनस्पतिजंतूसारक्या जैव ताणांत बाह्यजनन ऑर्निथिन वापराची संभाव्य भुमिका बरोच अभ्यास जावंक ना. ताचेपरस चड म्हत्वाचें म्हणल्यार ऑर्निथिनाचो रोग प्रतिकारशक्तीचेर जावपी परिणाम आनी ताचेकडेन संबंदीत आशिल्ल्या जैव रसायनीक आनी शारिरीक घडणुकांचो चडसो अभ्यास जावंक ना.
फळफळावळीच्या एस.स्क्लेरोटिओरम संसर्गाची गुंतागुंत समजून घेवप हें प्रभावी नियंत्रण रणनिती तयार करपाखातीर म्हत्वाचें आसता. ह्या अभ्यासांत आमी स्क्लेरोटिनिया स्क्लेरोटिओरम संसर्गाक फळफळावळीची संरक्षण यंत्रणा आनी प्रतिकारशक्ती वाडोवपाक डायमायन एल-ओर्निथिनाची संभाव्य भुमिका वळखुपाचो हेतू दवरलो. संसर्गजन्य वनस्पतींचे संरक्षण प्रतिसाद वाडोवपावांगडाच रेडॉक्स स्थिती सांबाळपाक एल-ऑर्निथिनाचीय मुखेल भुमिका आसता अशी आमी कल्पना करतात. एल-ओर्निथिनाचे संभाव्य परिणाम एन्झायमीक आनी बिगर एन्झायमीक अँटीऑक्सिडेंट संरक्षण यंत्रणेच्या नियंत्रणाकडेन आनी बुरशीच्या रोगजंतू निर्माण करपाचे/विषाणूजन्य घटक आनी संबंदीत प्रथिनांचे हस्तक्षेपाकडेन संबंदीत आसात अशें आमी सुचयतात. एल-ओर्निथिनाची ही दोट्टी कार्यक्षमताय धव्या साच्याचो परिणाम उणो करपाखातीर आनी सामान्य फळफळावळीच्या पिकांचो ह्या बळिश्ट बुरशीच्या रोगजंतूक प्रतिकार करपाची तांक वाडोवपाखातीर टिकावू रणनितीचो आशादायक उमेदवार थारता. सद्याच्या अभ्यासाचे परिणाम धव्या मोल्डाचेर नियंत्रण दवरपाखातीर आनी फळफळावळ उत्पादनाचेर ताचो परिणाम उणो करपाखातीर अभिनव, पर्यावरणाक अनुकूल पद्दती तयार करपाक मदत करूंक शकतात.
ह्या अभ्यासांत सामान्य कणंगाची संवेदनशील वेपारी जात जीझा ३ (Phaseolus vulgaris L. cv. Giza 3) ही प्रयोगीक साहित्य म्हणून वापरली. इजिप्तांतल्या शेतकी पिकां संशोधन संस्था (एफसीआरआय), शेतकी संशोधन केंद्र (एआरसी) हांगाच्या फळफळावळ संशोधन विभागान निरोगी बियो दयाळपणान दिली. हरितगृह परिस्थितींत (२५ ± २ सॅ., सापेक्ष आर्द्रता ७५ ± १%, ८ h उजवाड/१६ h काळोख) एस. पेरणी केल्या उपरांत (डीपीएस) ७-१० दिसांनी रोंपयो पातळ करून दर एका कुंड्यांत फकत दोन रोपां एकसारकी वाड आनी तीन पुरायपणान विस्तारिल्लीं पानां उरलीं. सगळ्या कुंड्यांतल्या झाडांक दोन सप्तकांनी एक फावट उदक दिवन दिल्ल्या जातीक शिफारस केल्ल्या प्रमाणांत म्हयन्याक पिकावळ दिताले.
एल-ओर्निथिनडायमायन (हाका (+)-(S)-2,5-डायमिनोपॅन्टानोइक आम्ल अशेंय म्हण्टात; सिग्मा-आल्ड्रिच, डार्मस्टॅड, जर्मनी) 500 मिग्रॅ/लीटर सांद्रताय तयार करपाखातीर पयलीं 50 मिग्रॅ 100 मिलिलीटर निर्जंतुकीत डिस्टिल्ड उदकांत विरगळायलें. उपरांत स्टॉक द्रावण पातळ करून उपरांतच्या प्रयोगांत ताचो उपेग केलो. थोडयाच उतरांनी सांगपाचें जाल्यार एल-ओर्निथिन सांद्रतायेच्यो स माळो (१२.५, २५, ५०, ७५, १०० आनी १२५ मिग्रॅ/लीटर) आंतकड्यांनी चांचणी केल्ली. तेभायर निर्जंतुकीत डिस्टिल्ड उदक नकारात्मक नियंत्रण (Mock) आनी वेपारी कवकनाशक “Rizolex-T” 50% ओलसाण दिवपाक येवपी पिठो (toclofos-methyl 20% + thiram 30%; KZ-Kafr El Zayat Pesticides and Chemicals Company, Kafr El Zaayat, Gharbia Governorate, Egypt) सकारात्मक नियंत्रण म्हणून वापरलो. वेपारी कवकनाशक “रिझोलेक्स-टी” ही पांच सांद्रतायेंत (2, 4, 6, 8 आनी 10 मिग्रॅ/लीटर) आंगांतल्यान चांचणी केली.
धव्या मोल्डाचीं खाशेलीं लक्षणां दाखोवपी सामान्य कणंगांच्या कांडांचे आनी फळांचे नमुने वेपारी शेतांतल्यान एकठांय केल्ले. संसर्गजन्य वनस्पती पदार्थांतल्या चडशा पदार्थांची वळख जाती/जाती प्रमाण (संवेदनशील वेपारी जात गीझा ३) आसली तरी हेर, खास करून थळाव्या बाजारांतल्यान मेळिल्लीं, अज्ञात जातींचीं आशिल्लीं. एकठांय केल्ल्या संसर्गजन्य पदार्थांक पयलीं ०.५% सोडियम हायपोक्लोरायट द्रावणान ३ मिनटां पृश्ठभागाचेर जंतूनाशक करून उपरांत निर्जंतुकीत डिस्टिल्ड उदकान जायते फावट धुवन निर्जंतुकीत फिल्टर पेपरान सुकयल्लें आनी चड उदक काडून उडयलें. उपरांत संसर्गजन्य अवयव मदल्या ऊतकांतल्यान (भलायकेन बऱ्या आनी संसर्गजन्य ऊतकांमदीं) ल्हान ल्हान कुडके करून बटाटाच्या डेक्स्ट्रोज अगार (PDA) माध्यमाचेर संवर्धन करून 25 ± 2 ° से. तशेंच मिश्र वा दूषित संस्कृतायेंतल्यान बुरशी वेगळे केल्ले पदार्थ शुध्द करपाखातीर मायसेलियम टिप पद्दत वापरताले. शुध्द केल्लो बुरशी वेगळो केल्लो पदार्थ पयलीं ताच्या संस्कृतीक आकारिकी खाशेलपणांचेर आदारून वळखलो आनी उपरांत सूक्ष्मदर्शक खाशेलपणांचेर आदारून एस. निमाणें कोच हाच्या सिध्दांतांक पाळो दिवपाखातीर सगळ्या शुध्द केल्ल्या आयझोलेटांची रोगजंतू निर्माण करपाची चांचणी संवेदनशील सामान्य कणंगां जात गिझा ३ चेर केल्ली.
तेभायर व्हाइट आनी हेर, १९९० हांणी वर्णन केल्लेप्रमाण अंतर्गत प्रतिलिपी स्पेसर (ITS) क्रमांकनाचेर आदारून सगळ्यांत आक्रमक एस. Baturo-Ciesniewska et al., 2017. थोडयाच उतरांनी, आयझोलेट बटाटाच्या डेक्स्ट्रोज ब्रोथांत (PDB) संवर्धन करून 25 ± 2 ° से. उपरांत बुरशीचें मायसेलियम एकठांय करून चीज कपड्यांतल्यान गाळून निर्जंतुकीत उदकान दोन फावटीं धुवन निर्जंतुकीत गाळणी कागदान सुकयलो. क्विक-डीएनएटीएम फंगल/बॅक्टेरियल मिनीप्रेप किट (Kuramae-Izioka, 1997; Atallah et al., 2022, 2024) वापरून जीनोमिक डीएनए वेगळें केलें. उपरांत ITS rDNA प्रदेशाक विशिश्ट प्राइमर जोडी ITS1/ITS4 (TCCGTAGGTGAACCTGCGG TCCTCCGCTTATTGATATGC; अपेक्षीत आकार: 540 bp) वापरून प्रवर्धित केलो ( Baturo-Ciesniewska et al., 2017 ). शुध्द केल्लीं पीसीआर उत्पादनां क्रमांकन करपाखातीर सादर केल्लीं (बीजिंग आओके डिंगशेंग बायोटेक्नॉलॉजी कंपनी लिमिटेड). आयटीएस आरडीएनए क्रमांकांचें द्विदिशी क्रमांकन सांगर क्रमांकन पद्दतीन केलें. उपरांत एकठांय केल्ल्या क्वेरी क्रमांकांची तुळा जेनबँक आनी नॅशनल सेंटर फॉर बायोटेक्नॉलॉजी इन्फॉर्मेशन (NCBI, http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/) हातूंतल्या नवीनतम डेटाकडेन BLASTn सॉफ्टवेअर वापरून केल्ली. क्वेरी क्रमाची तुळा एनसीबीआय जेनबँकांतल्या निमाण्या डेटांतल्यान (पूरक कोश्टक S1) मेळयल्ल्या हेर 20 एस. चडांत चड संभाव्यताय पद्दत आनी सामान्य वेळ-उलटपाक येवपी न्यूक्लिओटायड प्रतिस्थापन मॉडेल वापरून उत्क्रांतीचें विश्लेशण केलें (Nei and Kumar, 2000). सगळ्यांत चड लॉग-संभाव्यताय आशिल्लें झाड दाखयलां. शेजारी-जोडपी (NJ) झाड (Kumar et al., 2024) आनी चडांत चड पारसिमोनी (MP) झाड हांचे मदीं चड लॉग-संभाव्यताय आशिल्लें झाड निवडून अनुमान सोदपा खातीर सुरवातीचें झाड निवडटात. सामान्य वेळ-उलटपी मॉडेल वापरून मेजपाच्या जोडी प्रमाण अंतर मॅट्रिक्स वापरून एनजे झाड तयार केल्लें (Nei and Kumar, 2000).
एल-ओर्निथिन आनी “रिझोलेक्स-टी” ह्या बॅक्टेरियानाशकाची बॅक्टेरियाविरोधी क्रियाशीलता आगार प्रसार पद्दतीन आंगांतल्यान थारायली. पद्दत: एल-ओर्निथिन (500 मिग्रॅ/लीटर) स्टॉक विरयाचें फावो तें प्रमाण घेवन पीडीए पोशक माध्यमाच्या 10 मिलिलीटरांत बरे तरेन भरसून अनुक्रमान 12.5, 25, 50, 75, 100 आनी 125 मिग्रॅ/लीटर निमाणें सांद्रताय आशिल्ले विरय तयार करतात. नियंत्रण म्हणून कवकनाशक “रिझोलेक्स-टी” (2, 4, 6, 8 आनी 10 मिग्रॅ/लीटर) आनी निर्जंतुकीत डिस्टिल्ड उदकाची पांच सांद्रताय वापरली. माध्यम घन जाले उपरांत ताजें तयार केल्लो स्क्लेरोटिनिया स्क्लेरोटिओरम संस्कृतीचो मायसेलियम प्लग, ४ मिमी. समीकरण 1 वापरून एस.
हो प्रयोग दोन फावटीं परतून केलो, दर एका नियंत्रण/प्रायोगिक गटा खातीर स जैविक प्रतिकृती आनी दरेक जैविक प्रतिकृती खातीर पांच कुंडयो (दर कुंड्याक दोन वनस्पत) केल्यो. प्रायोगिक परिणामांची अचूकता, विस्वासपात्रताय आनी पुनरुत्पादनक्षमताय सुनिश्चीत करपाखातीर दर एका जैविक प्रतिकृतीचें दोन फावटीं (दोन तंत्रीक प्रतिकृती) विश्लेशण केलें. तेभायर अर्द चडांत चड प्रतिबंधात्मक सांद्रताय (IC50) आनी IC99 (Prentice, 1976) मेजपाखातीर प्रोबिट रिग्रेशन विश्लेशणाचो उपेग केलो.
हरितगृह परिस्थितींत एल-ओर्निथिनाची क्षमता मोलावपाखातीर सलग दोन कुंड्याचे प्रयोग केल्ले. थोडयाच उतरांनी मडक्यांनी निर्जंतुकीत मातयेची रेंव माती (३:१) भरून ताजें तयार केल्ल्या एस. पयलीं एस. उपरांत फुडल्या कांठावयल्यान चार ५ मिमी. माती घालचे पयलीं सगळ्या फ्लास्कांतलें आशय एकसारकेंपण सुनिश्चीत करपाखातीर पुरायपणान भरसून घेताले. उपरांत दर एका कुंड्यांत वसाहतीकरण करपी कोंड्याच्या मिश्रणाचे १०० ग्रॅम घालून रोगजंतूचें प्रमाण सतत दवरलें. टीका केल्ल्या कुंड्यांक बुरशीची वाड सक्रिय करपाखातीर उदक दिवन 7 दीस हरितगृह परिस्थितींत दवरले.
उपरांत दर एका कुंड्यांत गिझा ३ जातीचीं पांच बियो पेरली. एल-ओर्निथिन आनी कवकनाशक रिझोलेक्स-टी हांणी प्रक्रिया केल्ल्या कुंड्यांखातीर निर्जंतुकीत केल्लीं बियां पयलीं अनुक्रमान सुमार २५० मिग्रॅ/लीटर आनी ५० मिग्रॅ/लीटर अशें निमाणें आयसी९९ सांद्रताय आशिल्ल्या दोन संयुगांच्या उदकाच्या विरयांत दोन वरां भिजोवन उपरांत पेरण करचेपयलीं एक वर हवेंत सुकयतात. दुसरे वटेन नकारात्मक नियंत्रण म्हणून बियो निर्जंतुकीत डिस्टिल्ड उदकांत भिजोवन दवरताले. 10 दिसांनी पयलेच खेपे उदक दिवचे पयलीं रोपां पातळ करून दर एका कुंड्यांत फकत दोन वेवस्थीत रोपां उरलीं. तेभायर एस. नियंत्रण वनस्पतींनीय अशेच तरेन जखमी करून जखमेत सारकेच प्रमाणांत (०.५ ग्रॅम) निर्जंतुक, वसाहत नाशिल्लें कोंड्याचें मिश्रण घालून चड आर्द्रतेखाला दवरून रोगाची उदरगत जावपाखातीर वातावरणाचें अनुकरण करून उपचार गटांत सुसंगती सुनिश्चीत केली.
उपचार पद्दत: कणंगांच्या रोंप्यांक जमनींत शिंपणावळ करून एल-ओर्निथिन (२५० मिग्रॅ/लीटर) वा रिझोलेक्स-टी (५० मिग्रॅ/लीटर) ह्या कवकनाशकाच्या ५०० मिलिलीटर उदकांत उदक घालून उपरांत १० दिसांच्या अंतरान तीन फावटीं परतून प्रक्रिया केली. प्लेसीबो उपचार केल्ल्या नियंत्रणांत ५०० मिलिलीटर निर्जंतुकीत डिस्टिल्ड उदकान शिंपणावळ केल्ली. सगळ्यो उपचारां हरितगृह परिस्थितींत (२५ ± २ सॅ., ७५ ± १% सापेक्ष आर्द्रताय आनी ८ h उजवाड/१६ h काळोख असो प्रकाशकाळ) केल्यो. सगळ्या कुंड्यांक पंदराशाक उदक दिवन म्हयन्याक एक फावट समतोल एनपीके सारें (२०-२०-२०, ३.६% गंधक आनी टीई सूक्ष्म घटकां सयत; ज़ेन सीड्स, इजिप्त) ३-४ ग्रॅम/लीटर सांद्रतायेन विशिश्ट जातीच्या सुचोवण्यांप्रमाण आनी निर्मात्याच्या सुचोवण्यांप्रमाण पानांचेर फवारो मारून प्रक्रिया केली. हेर तरेन सांगले बगर, दर एका जैविक प्रतिकृतींतल्यान उपचारा उपरांत 72 h (hpt) वेळार पुरायपणान विस्तारीत जाल्लीं पिकिल्लीं पानां (वयल्यान दुसरी आनी तिसरी पानां) एकठांय करून, एकजीव करून, एकठांय करून -80 ° से अँटीऑक्सिडेंट आनी जीन अभिव्यक्ती.
टेरन आनी हेर हांणी सुदारीत केल्ल्या पेत्झोल्ट आनी डिक्सन प्रमाणाचेर (1996) आदारीत 1-9 प्रमाण (पूरक कोश्टक S2) वापरून टीका केल्या उपरांत सप्तकी 21 दिसांनी (dpi) धव्या मोल्ड संसर्गाची तीव्रता मेजली. (2006) हांणी केला. थोडयाच उतरांनी सांगपाचें जाल्यार, इंटरनोड्स आनी नोड्स हांचेवांगडा घायांची वाड पळोवपाखातीर टीका करपाच्या बिंदूसावन सुरू करून कणंगांच्या झाडांच्या कांडांची आनी फांट्यांची तपासणी केल्ली. उपरांत टीका करपाच्या बिंदूसावन कांड वा फांट्याभोंवतणीं सगळ्यांत पयसुल्ल्या बिंदूमेरेनच्या जखमेचें अंतर मेजून जखमेच्या सुवातेर आदारून १-९ गूण दिलो, जंय (१) टीका करपाच्या बिंदूलागीं दिसपी संसर्ग ना अशें दिसून आयलें आनी (२-९) जखमेचो आकार ल्हव ल्हव वाडटा आनी गांठ/अंतर्गत प्रगती दाखयली (पूरक कोश्टक S2). उपरांत धव्या साच्याच्या संसर्गाची तीव्रता टक्केवारींत रुपांतरीत करून सूत्र 2:
तेभायर रोग प्रगती वक्र (AUDPC) खाला आशिल्लो क्षेत्रफळ (Shaner and Finney, 1977) वापरून मेजलो, जें हालीं समीकरण 3 वापरून सामान्य कणंगाच्या धव्या कुसपाखातीर (Chauhan et al., 2020) अनुकूल केल्लें:
जंय Yi = ti वेळार रोगाची तीव्रता, Yi+1 = फुडल्या वेळार ti+1 वेळार रोगाची तीव्रता, ti = पयल्या मापनाचो वेळ (दिसांनी), ti+1 = फुडल्या मापनाचो वेळ (दिसांनी), n = वट्ट वेळ बिंदू वा निरिक्षण बिंदू. वनस्पतीची उंचाय (सेंमी.), दर वनस्पतीक फांट्यांची संख्या, दर वनस्पतीक पानांची संख्या हांचो आस्पाव आशिल्ल्या कणंगांच्या वनस्पतीचे मापदंड सगळ्या जैविक प्रतिकृतींनी सप्तकी 21 दीस नोंद केल्ले.
दर एका जैविक प्रतिकृतींत उपचारा उपरांत 45 व्या दिसा (निमाणे उपचारा उपरांत 15 दिसांनी) पानांचे नमुने (वयल्यान दुसरी आनी तिसरी पुरायपणान विकसीत जाल्लीं पानां) एकठांय केल्लीं. दर एका जैविक प्रतिकृतींत पांच कुंडयो (दर कुंड्यांत दोन वनस्पत) आशिल्ल्यो. काळखांत ४ सॅ. २४ h उपरांत नमुन्यांचे अपकेंद्रीकरण करून तीन वेगवेगळ्या तरंगलांबायचेर शोशणक्षमता मेजून (Lichtenthaler, 1987) हाचे पद्दतीप्रमाण UV-160A स्पॅक्ट्रोफोटोमीटर (Shimadzu Corporation, Japan) वापरून क्लोरोफिल अ, क्लोरोफिल ब आनी कॅरोटीनॉयड हें प्रमाण रंगमापन पद्दतीन थारावपाखातीर सुपरनॅटॅंट एकठांय केलें (ए४७०, ए६४६ आनी ए६६३ एनएम). निमाणें लिक्टेन्थॅलर (१९८७) हाणें वर्णन केल्ल्या सकयल दिल्ल्या ४-६ सूत्रांचो उपेग करून प्रकाशसंश्लेशण रंगद्रव्यांचो आशय मेजलो.
उपचारा उपरांत (hpt) ७२ h उपरांत दर एका जैविक प्रतिकृतींतल्यान पानां (वयल्यान दुसरी आनी तिसरी पुरायपणान विकसीत जाल्लीं पानां) एकठांय करून हायड्रोजन पेरॉक्सायड (H2O2) आनी सुपरऑक्सायड आयन (O2•−) हांचे थळाव्या आंतकड्यांच्या रसायनीक स्थानिकीकरणाखातीर केलें. दर एका जैविक प्रतिकृतींत पांच कुंडयो (दर कुंड्यांत दोन वनस्पत) आशिल्ल्यो. दरेक जैविक प्रतिकृतीचें डुप्लीकेट (दोन तंत्रीक प्रतिकृती) विश्लेशण करून पद्दतीची अचूकता, विस्वासपात्रताय आनी पुनरुत्पादनक्षमताय सुनिश्चीत केल्ली. रोमेरो-प्युर्टास आनी हेर हांणी वर्णन केल्ले पद्दतीप्रमाण अनुक्रमान ०.१% ३,३′-डायमिनोबेन्झीडीन (DAB; Sigma-Aldrich, Darmstadt, Germany) वा नायट्रोब्लू टेट्राझोलियम (NBT; Sigma-Aldrich, Darmstadt, Germany) वापरून H2O2 आनी O2•− हें थारायलें. (2004) आनी अॅडम इ. (1989) हांणी ल्हान ल्हान बदल करून. H2O2 च्या आंतकड्यांच्या रसायनीक स्थानिकीकरणाखातीर १० मिमी. पत्रकां 0.15% (v/v) टीसीए हातूंत 4:1 (v/v) इथेनॉल:क्लोरोफॉर्म (अल-गोमहोरिया फार्मास्युटिकल्स अँड मेडिकल सप्लायज, कायरो, इजिप्त) हातूंत प्रक्षालित करून उपरांत काळोख जायसर उजवाडाक दवरल्यो. तेच प्रमाण O2•− च्या आंतकड्यांच्या रसायनीक स्थानिकीकरणाखातीर ०.१ w/v % HBT आशिल्ल्या १० मिमी. पत्रकां कोठारांतल्या तापमानांत २० मि. परिणामी तपकिरी (H2O2 निर्देशक म्हणून) वा निळो-वायलेट (O2•− निर्देशक म्हणून) रंगाची तीव्रता प्रतिमा प्रक्रिया पॅकेज ImageJ (http://fiji.sc; 7 मार्च 2024 दिसा मेळिल्लें) हांची फिजी आवृत्ती वापरून मोलावली.
मॅलोनडायल्डीहायड (MDA; लिपिड पेरॉक्सायडेशनाचे निशाण म्हणून) डु आनी ब्रॅमलेज (1992) हांच्या पद्दतीप्रमाण मात्शे बदल करून थारायलें. दर एका जैविक प्रतिकृतींतल्यान (वयल्यान दुसरी आनी तिसरें पुरायपणान विकसीत जाल्लीं पानां) उपचारा उपरांत 72 h (hpt) एकठांय केल्लीं. दर एका जैविक प्रतिकृतींत पांच कुंड (दर कुंडांत दोन वनस्पत) आस्पावताले. दरेक जैविक प्रतिकृतीचें डुप्लीकेट (दोन तंत्रीक प्रतिकृती) विश्लेशण करून पद्दतीची अचूकता, विस्वासपात्रताय आनी पुनरुत्पादनक्षमताय सुनिश्चीत केल्ली. थोडयाच उतरांनी सांगपाचें जाल्यार ०.०१% ब्युटिलेटेड हायड्रोक्सीटोल्यूइन (BHT; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) आशिल्ल्या २०% ट्रायक्लोरोएसिटिक आम्ल (TCA; MilliporeSigma, Burlington, MA, USA) च्या आदारान एमडीए काडपाखातीर ०.५ ग्रॅम दळिल्ल्या पानांचो ऊतक वापरलो. उपरांत UV-160A स्पॅक्ट्रोफोटोमीटर (Shimadzu Corporation, Japan) वापरून 532 आनी 600 nm हांगा शोशणक्षमता मेजून सुपरनॅटॅंटांतलें एमडीएचें प्रमाण रंगमापन पद्दतीन थारायलें आनी उपरांत nmol g−1 FW अशें दर्शयलें.
बिगर एन्झायमीक आनी एन्झायमीक अँटीऑक्सिडेंटांचें मुल्यांकन करपाखातीर दर एका जैविक प्रतिकृतींतल्यान उपचारा उपरांत 72 h (hpt) पानां (वयल्यान दुसरी आनी तिसरी पुरायपणान विकसीत जाल्लीं पानां) एकठांय केल्लीं. दर एका जैविक प्रतिकृतींत पांच कुंडयो (दर कुंड्यांत दोन वनस्पत) आशिल्ल्यो. दर एका जैविक नमुन्याचें डुप्लीकेट (दोन तंत्रीक नमुन्यांचे) विश्लेशण केलें. दोन पानां द्रव नायट्रोजनान दळून एन्झायमीक आनी बिगर एन्झायमीक अँटीऑक्सिडेंट, एकूण अॅमिनो अॅसिड, प्रोलीनचें प्रमाण, जीन अभिव्यक्ती आनी ऑक्सालेट प्रमाण थारावपाखातीर थेट वापरताले.
काहकोनेन आनी हेर हांणी वर्णन केल्ले पद्दतींत मात्शे बदल करून फोलिन-सिओकॅल्ट्यू अभिक्रियाकारक (सिग्मा-आल्ड्रिच, सेंट लुईस, एमओ, अमेरिकेचीं संयुक्त संस्थानां) वापरून एकूण विद्राव्य फिनोलिक थारायले. (1999) हांणी केला. थोडयाच उतरांनी सांगपाचें जाल्यार सुमार ०.१ ग्रॅम एकजीव पानांचे ऊतक २० मिलिलीटर ८०% मेथॅनॉलान काळखांत २४ h काडून उदकांतल्यान अपक्षेपण केल्या उपरांत एकठांय केलें. नमुन्याच्या अर्काचें ०.१ मिलिलीटर ०.५ मिलिलीटर फोलिन-सिओकॅल्ट्यू अभिक्रियाकारक (१०%) घालून ३० सेकंद हालोवन ५ मि. उपरांत दरेक नळयेंत ०.५ मिलिलीटर २०% सोडियम कार्बोनेट द्रावण (Na2CO3; Al-Gomhoria Pharmaceuticals and Medical Supplies Company, Cairo, Egypt) घालून बरे तरेन भरसून काळखांत १ h उबें दवरलें. उब्या केल्या उपरांत विक्रिया मिश्रणाची शोशणक्षमता UV-160A स्पॅक्ट्रोफोटोमीटर (Shimadzu Corporation, Japan) वापरून 765 nm मेजली. नमुन्याच्या अर्कांतल्या वट्ट विद्राव्य फिनोलांची सांद्रताय गॅलिक आम्ल मापांकन वक्र (Fisher Scientific, Hampton, NH, USA) वापरून थारायली आनी दर ग्राम ताज्या वजनाक (mg GAE g-1 ताजें वजन) गॅलिक आम्ल समतुल्य मिलीग्राम अशें दर्शयलें.
एकूण विद्राव्य फ्लॅव्होनॉयडाचें प्रमाण Djeridane et al. (2006) हांणी मात्शे बदल करून. थोडयाच उतरांनी सांगपाचें जाल्यार वयल्या मेथॅनॉल अर्काचें ०.३ मिलिलीटर ५% अॅल्युमिनियम क्लोरायड विरय (AlCl3; Fisher Scientific, Hampton, NH, USA) हातूंत भरसून, खरपणान हालयले आनी उपरांत कोठारांतल्या तापमानांत ५ मि वखदां आनी वैजकी पुरवण, कायरो, इजिप्त), बरी भरसण करून काळखांत ३० मि. उब्या केल्या उपरांत विक्रिया मिश्रणाची शोशणक्षमता UV-160A स्पॅक्ट्रोफोटोमीटर (Shimadzu Corporation, Japan) वापरून 430 nm मेजली. नमुन्याच्या अर्कांतल्या एकूण विद्राव्य फ्लॅव्होनॉयडांची सांद्रताय रुटीन मापांकन वक्र (TCI America, Portland, OR, USA) वापरून थारायली आनी उपरांत दर ग्राम ताज्या वजनाक (mg RE g-1 ताजें वजन) रुटीन समतुल्य मिलीग्राम अशें दर्शयलें.
योकोयामा आनी हिरामात्सु (2003) हांणी सुचयल्ले पद्दतीचेर आदारीत आनी सन आनी हेर हांणी सुदारीत केल्ल्या पद्दतीचेर आदारीत सुदारीत निनहायड्रीन अभिक्रियाकारक (थर्मो सायन्टिफिक केमिकल्स, वाल्थम, एम.ए., अमेरिकेचीं संयुक्त संस्थानां) वापरून कणंगांच्या पानांतलें वट्ट मुक्त अॅमिनो अॅसिड आशिल्लें प्रमाण थारायलें. (2006) हांणी केला. थोडयाच उतरांनी ०.१ ग्रॅम दळिल्लें ऊतक पीएच ५.४ बफरान काडून २०० μL सुपरनॅटॅंटाचेर २०० μL निनहायड्रीन (२%) आनी २०० μL पिरिडीन (१०%; स्पॅक्ट्रम केमिकल, न्यू ब्रन्सविक, एनजे, अमेरिकेचीं संयुक्त संस्थानां) हांचेवांगडा विक्रिया करून उकळत्या उदकाच्या न्हाणांत ३० मि UV-160A स्पॅक्ट्रोफोटोमीटर (शिमाझू कॉर्पोरेशन, जपान) वापरून 580 एनएम. दुसरे वटेन बेट्स पद्दतीन प्रोलीन थारायलें (Bates et al., 1973). प्रोलीन ३% सल्फोसॅलिसिलिक आम्ल (थर्मो सायन्टिफिक केमिकल्स, वाल्थम, एम.ए., अमेरिकेचीं संयुक्त संस्थानां) घेवन काडून अपक्षेपणा उपरांत ०.५ मिलिलीटर सुपरनॅटॅंट १ मिलिलीटर हिमयुगीन एसिटिक आम्ल (फिशर सायन्टिफिक, हॅम्पटन, एनएच, अमेरिकेचीं संयुक्त संस्थानां) आनी निनहायड्रीन अभिक्रियाकारक हांचेवांगडा भरसून ९० सॅ.तापमानाचेर ४५ मि वयर सांगिल्ले प्रमाण वर्णपट प्रकाशमापक वापरून ५२० एनएम. पानांच्या अर्कांतले एकूण मुक्त अॅमिनो अॅसिड आनी प्रोलीन अनुक्रमान ग्लायसीन आनी प्रोलीन मापांकन वक्र (सिग्मा-आल्ड्रिच, सेंट लुईस, एमओ, अमेरिकेचीं संयुक्त संस्थानां) वापरून थारायले आनी ताजें वजन मिग्रॅ/ग्रॅम अशें दर्शयलें.
अँटीऑक्सिडेंट एंझायमांची एन्झायमीक क्रियाशीलता थारावपाखातीर १ मिमी.ईडीटीए-एनए२ (सिग्मा-आल्ड्रिच, सेंट लुईस, एमओ, अमेरिकेचीं संयुक्त संस्थानां) आनी ७.५% पॉलीव्हिनिलपायरोलिडोन (पीव्हीपी; सिग्मा-आल्ड्रीच, सेंट लुईस, एमओ, ४. अमेरिकेंत), शीतकरणांत (4 ° से.) 10,000 × ग्रॅम 20 मि. उपरांत कॅटालेज (CAT) ची २ मिलिलीटर ०.१ एम सोडियम फॉस्फेट बफर (पीएच ६.५; सिग्मा-आल्ड्रिच, सेंट लुईस, एमओ, अमेरिकेचीं संयुक्त संस्थानां) आनी १०० मायक्रोलीटर २६९ मिमी. उस्मान आनी हेर, 2023). हॅराच आनी हेर हांची पद्दत वापरून गुआयकोल-आदारीत पेरॉक्सिडायज (POX) एन्झायमीक क्रियाशीलता थारायली. (2009) हांणी केला. (2008) हांणी ल्हान ल्हान बदल करून (El-Nagar et al., 2023; Osman et al., 2023) आनी पॉलीफेनॉल ऑक्सिडेज (PPO) ची एन्झायमीक क्रियाशीलता 2.2 मिलिलीटर 100 mM सोडियम फॉस्फेट बफर (pH 6.0), 100 μl गुआयकोल (TCI रसायनां, पोर्टलँड, ओआर, अमेरिकेंत) आनी १०० μl १२ मिमी. पद्दतींत (एल-नगर आनी हेर, 2023; उस्मान आनी हेर, 2023) कडल्यान मात्सो बदल केल्लो. ०.१ एम फॉस्फेट बफरांत (पीएच ६.०) ताजें तयार केल्ल्या ३ मि.ली. 240 एनएम (A240) हांगा H2O2 च्या विघटनाचेर नियंत्रण दवरून CAT क्रियाशीलता मेजली, 436 nm (A436) हांगा शोशणक्षमताय वाडपाचेर नियंत्रण दवरून POX क्रियाशीलता मेजली आनी UV-160A वापरून दर 30 सेकंदाक 3 मि स्पेक्ट्रोफोटोमीटर (शिमाझू, जपान) हें यंत्र.
रियल-टायम आरटी-पीसीआर वापरून पेरोक्सिसोमल कॅटालेज (PvCAT1; GenBank Accession No. KF033307.1), सुपरऑक्सायड डिस्मुटेज (PvSOD; GenBank Accession No. XM_068639556.1), आनी ग्लुटाथिओन रिडक्टेज (PvGR; GenBank Accession No. केवाय१९५००९.१), निमाण्या उपचारा उपरांत ७२ h कणंगाच्या पानांत (वयल्यान दुसरें आनी तिसरें पुरायपणान विकसीत जाल्लें पानां). थोडयाच उतरांनी निर्मात्याच्या नेमाप्रमाण सिम्पली पी टोटल आरएनए एक्सट्रॅक्शन किट (Cat. No. BSC52S1; BioFlux, Biori Technology, China) वापरून आरएनए वेगळें केलें. उपरांत निर्मात्याच्या सुचोवण्यांप्रमाण TOP scriptTM cDNA Synthesis Kit वापरून cDNA संश्लेशण केलें. वयल्या तीन जनुकांचे प्राइमर क्रमांक पूरक कोश्टक S3 त दिल्ले आसात. PvActin-3 (GenBank accession number: XM_068616709.1) हें घरगुती जीन म्हणून वापरलें आनी 2-ΔΔCT पद्दतीन सापेक्ष जीन अभिव्यक्ती मेजली (Livak and Schmittgen, 2001). जैव ताण (सामान्य फळफळावळ आनी एंथ्रॅक्नोज बुरशी Colletotrichum lindemuthianum हांचेमदीं असंगत परस्पर क्रिया) आनी अजैवीक ताण (दुकळ, खारसाण, उणें तापमान) हांचेखाला ऍक्टिनाची स्थिरताय दाखयली (Borges et al., 2012).
आमी सुरवेक प्रथिन-प्रथिन BLAST साधन (BLASTp 2.15.0+) वापरून एस. थोडयाच उतरांनी आमी एस्परजिलस फिजीयन्सिस सीबीएस ३१३.८९ (AfOAH; टॅक्सायड: ११९१७०२; जेनबँक एक्सेसन नंबर एक्सपी_०४०७९९४२८.१; ३४२ अॅमिनो अॅसिड) आनी पेनिसिलियम लागेना (PlOAH; टॅक्सायड: ९४२१८; जेनबँक एक्सेसन क्रमांक) हांचेपसून मेळपी ओएएच वापरलो XP_056833920.1;316 अॅमिनो अॅसिड) एस. नॅशनल सेंटर फॉर बायोटेक्नॉलॉजी इन्फॉर्मेशन (NCBI) संकेतथळार, http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/ ह्या संकेतथळार जेनबँकांत सगळ्यांत हालीं उपलब्ध आशिल्ल्या एस.
तेभायर एस.स्क्लेरोटिओरम (SsOAH) हाचेपसून अदमास केल्लो OAH जनुक आनी ए.फिजीयन्सिस सीबीएस 313.89 आनी पी अल., १९९२) हांणी केला. वंशपरंपरेन झाडाक एस. 2007 वर्सा). तेभायर एस. https://espript.ibcp.fr/ESPript/ESPript/index.php) ह्या संकेतथळार मेळटा.
ते भायर एस. निमाणें प्रथिन होमोलॉजी/एनालॉगी रिकग्निशन इंजिन (Phyre2 सर्वर आवृत्ती 2.0; http://www.sbg.bio.ic.ac.uk/~phyre2/html/page.cgi?id=index) (केली आनी हेर, 2015) वापरून अदमास केल्ल्या एस SWISS-MODEL सर्वर (https://swissmodel.expasy.org/) (बियासिनी आनी हेर, 2014). अदमास केल्लीं तीन आयामी संरचनां (पीडीबी स्वरूप) UCSF-Chimera पॅकेज (आवृत्ती 1.15; https://www.cgl.ucsf.edu/chimera/ ) वापरून परस्पर दृश्टीकोन केल्लीं (Pettersen et al., 2004).
स्क्लेरोटिनिया स्क्लेरोटिओरम ह्या वनस्पतीच्या मायसेलियमांतल्या ऑक्सालोएसिटेट एसिटाइलहायड्रोलेज (SsOAH; GenBank accession number: XM_001590428.1) ची प्रतिलिपी पातळी थारावपाखातीर परिमाणात्मक रियल-टायम प्रतिदीप्ति पीसीआर वापरली. थोडयाच उतरांनी पीडीबी आशिल्ल्या फ्लास्कांत एस. उपरांत पेशींचेर एल-ओर्निथिन आनी कवकनाशक रिझोलेक्स-टी हांणी निमाण्या आयसी५० सांद्रतायेचेर (अनुक्रमान सुमार ४० आनी ३.२ मिग्रॅ/लीटर) प्रक्रिया करून उपरांत त्याच परिस्थितींत आनीक २४ h संवर्धन केलें. उब्या केल्या उपरांत संस्कृताय 2500 आरपीएमचेर 5 मि. तेच प्रमाण संसर्ग जाले उपरांत ०, २४, ४८, ७२, ९६ आनी १२० h उपरांत संसर्गजन्य ऊतकांच्या पृश्ठाचेर धवो मोल्ड आनी कापसाचो मायसेलियम तयार जाल्ल्या संसर्गजन्य वनस्पतींपसून बुरशीचें मायसेलियम एकठांय केलें. बुरशीच्या मायसेलियमांतल्यान आरएनए काडून उपरांत वयर सांगिल्लेप्रमाण सीडीएनए संश्लेशण केलें. SsOAH खातीर प्राइमर क्रमांक पूरक कोश्टक S3 त दिल्ले आसात. घरगुती जीन म्हणून SsActin (GenBank accession number: XM_001589919.1) वापरलें आनी 2-ΔΔCT पद्दतीचो उपेग करून सापेक्ष जीन अभिव्यक्ती मेजली (Livak and Schmittgen, 2001).
बटाटाच्या डेक्स्ट्रोज ब्रोथांत (PDB) आनी बुरशीचो रोगजंतू स्क्लेरोटिनिया स्क्लेरोटिओरम आशिल्ल्या वनस्पतीच्या नमुन्यांनी जू आनी झांग (2000) हांच्या पद्दतीन मात्शे बदल करून ऑक्सॅलिक आम्ल थारायलें. थोडयाच उतरांनी एस. उब्या केल्या उपरांत बुरशीची संवर्धन पयलीं व्हॉटमन #1 फिल्टर पेपरांतल्यान गाळून उपरांत 2500 आरपीएमचेर 5 मि. ऑक्सॅलेटाचें आनीक परिमाणात्मक निश्र्चितीकरण करपाखातीर सुपरनॅटॅंट एकठांय करून ४ सॅ. वनस्पतीचे नमुने तयार करपाखातीर सुमार ०.१ ग्रॅम वनस्पतीच्या ऊतकांचे कुडके तीन फावटीं डिस्टिल्ड उदकान (दर खेपे २ मिलिलीटर) काडले. उपरांत नमुन्यांचे 2500 आरपीएमचेर 5 मि.
ऑक्सॅलिक आम्लाचे परिमाणात्मक विश्लेशणाखातीर कंवचेच्या स्टॉपर केल्ल्या नळयेंत विक्रिया मिश्रण फुडल्या क्रमांकान तयार केलें: ०.२ मिलिलीटर नमुनो (वा पीडीबी संवर्धन गाळणी वा ऑक्सॅलिक आम्ल प्रमाण विरय), ०.११ मिलिलीटर ब्रोमोफिनोल ब्लू (बीपीबी, १ मिमी.; फिशर केमिकल, पिट्सबर्ग, पीए, अमेरिकेचीं संयुक्त संस्थानां), ०.१९८ मिलिलीटर १ एम सल्फ्युरिक आम्ल (H2SO4; Al-Gomhoria Pharmaceuticals and Medical Supplies, कायरो, इजिप्त) आनी 0.176 मिलिलीटर 100 मिमी न्हाण. १० मि.उपरांत ०.५ मिलिलीटर सोडियम हायड्रॉक्सायड विरय (NaOH; ०.७५ एम) घालून विक्रिया थांबयली. विक्रिया मिश्रणाची शोशणक्षमता (A600) UV-160 स्पॅक्ट्रोफोटोमीटर (Shimadzu Corporation, Japan) वापरून 600 nm मेजली. संवर्धन गाळणी आनी वनस्पती नमुन्यांचे प्रमाण थारावपाखातीर अनुक्रमान पीडीबी आनी डिस्टिल्ड उदकाचो उपेग नियंत्रण म्हणून केलो. संवर्धन गाळिल्ल्या पदार्थांतली ऑक्सॅलिक आम्लाची सांद्रताय, जी पीडीबी माध्यमाच्या दर मिलीलीटर (μg.mL−1) ऑक्सॅलिक आम्लाचे मायक्रोग्राम (μg.mL−1) आनी पानांच्या अर्कांत, दर ग्राम ताज्या वजनाक (μg.g−1 FW) ऑक्सॅलिक आम्लाचे मायक्रोग्राम (μg.g−1 FW) अशें दर्शयतात, ऑक्सॅलिक आम्ल मापांकन वक्र (Thermo Fisher Scientific Chemicals, Waltham, MA, अमेरिकेचीं संयुक्त संस्थानां).
पुराय अभ्यासांत सगळे प्रयोग पुरायपणान यादीक केल्ल्या आराखड्यांत (CRD) तयार केल्ले आनी दर उपचाराक स जैविक प्रतिकृती आनी दरेक जैविक प्रतिकृतींत पांच कुंडयो (दर कुंड्याक दोन वनस्पती) हेर तरेन सांगले बगर. जैविक प्रतिकृतींचें डुप्लीकेट (दोन तंत्रीक प्रतिकृती) विश्लेशण केलें. त्याच प्रयोगाची पुनरुत्पादनक्षमता तपासपाखातीर तंत्रीक प्रतिकृती वापरल्यो पूण फटीच्यो प्रतिकृती टाळपाखातीर सांख्यिकी विश्लेशणांत तांचो उपेग केलो ना. व्हेरिएन्स विश्लेशण (ANOVA) आनी उपरांत ट्युकी-क्रामर प्रामाणीकपणान म्हत्वाचो फरक (HSD) चांचणी (p ≤ 0.05) वापरून डेटाचें सांख्यिकी विश्लेशण केलें. आंतकड्यांनी केल्ल्या प्रयोगांखातीर प्रोबिट मॉडेलाचो उपेग करून आयसी५० आनी आयसी९९ हांचीं मोलां मेजली आनी ९५% विस्वासांतर मेजले.
इजिप्तांतल्या एल गाबिया गव्हर्नरांतल्या वेगवेगळ्या सोयाबीन शेतांतल्यान वट्ट चार आयझोलेट एकठांय केल्ले. पीडीए माध्यमाचेर सगळ्या आयझोलेटांतल्यान मळमळीत धवें मायसेलियम तयार जालें आनी तें रोखडेंच कापूस धवें जालें (आकृती १ अ) आनी उपरांत स्क्लेरोटियमाच्या पांवड्यार बेज वा तपकिरी रंगाचें जालें. स्क्लेरोटिया चड करून दाट, काळे, गोलाकार वा अनियमीत आकाराचे, ५.२ ते ७.७ मिमी.लांब आनी ३.४ ते ५.३ मिमी.व्यासाचे आसतात (आकृती १ ब). चार वेगळे केल्ल्या प्राण्यांनी 25 ± 2 ° से प्लेट; तेच प्रमाण #3 ह्या आयसोलेटांत हेर आयसोलेटांपरस पीडीबींत चड ऑक्सॅलिक आम्ल तयार जालें (3.33 ± 0.49 μg.mL−1; आकृती 1D). आयसोलेट #3 हातूंत स्क्लेरोटिनिया स्क्लेरोटिओरम ह्या वनस्पतिजंतू निर्माण करपी बुरशीचीं खाशेलीं आकारिकी आनी सूक्ष्म खाशेलपणां दिसून आयलीं. देखीक- पीडीएचेर आयसोलेट #3 ह्यो वसाहती नेटान वाडल्यो, मळमळीत धवे (आकृती 1 अ), उलट बेज वा हळदुवे सॅलमन हळडुवे-तपकिरी रंगाचे आशिल्ले आनी 9 सेंमी.व्यासाच्या प्लेटीचो पृश्ठभाग पुरायपणान व्यापून दवरपाखातीर 25 ± 2 सॅ. वयल्या आकारिकीशास्त्रीय आनी सूक्ष्मदर्शक खाशेलपणांचेर आदारीत आयसोलेट #3 हें स्क्लेरोटिनिया स्क्लेरोटिओरम अशें वळखलें.
आकृती 1. सामान्य फळफळावळीच्या पिकांतल्यान वेगळे केल्ल्या एस. (A) पीडीए माध्यमाचेर चार एस हरितगृह परिस्थितींत गीझा ३ अशी जात. मोलां पांच जैविक प्रतिकृतींचें सरासरी ± SD दाखयतात (n = 5). वेगवेगळे अक्षर उपचारांमदीं सांख्यिकी नदरेन म्हत्वाचे फरक दाखयतात (p < 0.05). (F–H) आयसोलेट #3 (dpi) च्या टीका केल्या उपरांत अनुक्रमान जमनीवयल्या कांडांचेर आनी सिलिकांचेर सादारण धव्या मोल्डाचीं लक्षणां दिसलीं. (I) एस. क्लस्टरिंग ओळींवयले आंकडे प्रदेश आच्छादन (%) दाखयतात, आनी क्लस्टरिंग ओळीं सकयल आशिल्ले आंकडे फांट्याची लांबाय दाखयतात.
तेभायर रोगजंतू निर्माण करपाची खात्री करपाखातीर मेळिल्ल्या चार एस. मेळिल्ले सगळे बुरशीचे वेगळेपण जरी रोगजंतू निर्माण करपी आसले तरी पाचव्या कणंगाक (cv. Giza 3) संसर्ग जावंक शकता, ताका लागून जमनीवयल्या सगळ्या भागांचेर (आकृती 1F), खास करून कांडांचेर (आकृती 1G) आनी फळांचेर (आकृती 1H) टीका केल्या उपरांत 10 दिसांनी (dpi) धव्या मोल्डाचीं खाशेलीं लक्षणां दिसूंक शकतलीं तरी दोन स्वतंत्र प्रयोगांत आयसोलेट 3 हो सगळ्यांत आक्रमक आयसोलेट आशिल्लो. आयसोलेट ३ हातूंत कणंगांच्या झाडांचेर सगळ्यांत चड रोगाची तीव्रता (%) आशिल्ली (संसर्गा उपरांत अनुक्रमान ७, १४ आनी २१ दिसांनी २४.० ± ४.०, ५८.० ± २.० आनी ७६.७ ± ३.१; आकृती १एफ).
सगळ्यांत आक्रमक एस. आयसोलेट #3 आनी 20 संदर्भ आयसोलेट/जातींमदल्या वंशपरंपरेन विश्लेशणांत तांचेमदीं चड सारकेंपण (>99%) दिसून आयलें. एस OR206374.1; नव्या क्रमांकाक एनसीबीआय डेटाबेसांत जमा केला आनी ताका “स्क्लेरोटिनिया स्क्लेरोटिओरम – आयसोलेट वायएन-25” (जेनबँक एक्सेसन नंबर पीव्ही202792) अशें नांव दिलां. आयसोलेट ३ हो सगळ्यांत आक्रमक आयसोलेट अशें पळोवंक मेळटा; देखून उपरांतच्या सगळ्या प्रयोगांत अभ्यासाखातीर हो आयसोलेट वेंचून काडलो.
एस. एल-ओर्निथिनान बॅक्टेरियाविरोधी परिणाम केलो आनी ल्हव ल्हव एस. चांचणी केल्ल्या सगळ्यांत चड सांद्रतायेचेर (125 मिग्रॅ/लीटर) एल-ओर्निथिनान सगळ्यांत चड मायसेलियम वाड आडावपाचें प्रमाण (99.62 ± 0.27%; आकृती 2 बी) दाखयलें, जें वेपारी कवकनाशक रिझोलेक्स-टी (प्रतिबंध दर 99.45 ± 0.39%; आकृती 2C) परस चड प्रमाणांत चांचणी केल्ल्या प्रमाण (10 मिग्रॅ/लीटर) इतलेंच आशिल्लें अशें दिसून येता कार्यक्षमताय.
आकृती 2. स्क्लेरोटिनिया स्क्लेरोटिओरम हांचेआड एल-ओर्निथिनाची आंगांतल्यान बॅक्टेरियाविरोधी क्रियाशीलता. (अ) एल-ओर्निथिनाच्या वेगवेगळ्या सांद्रतायेच्या एस. (B, C) अनुक्रमान एल-ओर्निथिन (12.5, 25, 50, 75, 100 आनी 125 मिग्रॅ/लीटर) वा रिझोलेक्स-टी (2, 4, 6, 8 आनी 10 मिग्रॅ/लीटर) हांच्या वेगवेगळ्या प्रमाणांत उपचारा उपरांत एस. मोलां पांच जैविक प्रतिकृतींचें सरासरी ± SD दाखयतात (n = 5). वेगवेगळीं अक्षरां उपचारांमदलो सांख्यिकी फरक दाखयतात (p < 0.05). (D, E) अनुक्रमान एल-ओर्निथिन आनी वेपारी कवकनाशक रिझोलेक्स-टी हांचे प्रोबिट मॉडेल रिग्रेशन विश्लेशण. प्रोबिट मॉडेल रिग्रेशन रेखा घन निळी रेखा म्हणून दाखयल्या आनी विस्वासांतर (95%) डॅश तांबडी रेखा म्हणून दाखयल्या.
तेभायर प्रोबिट रिग्रेशन विश्लेशण केलें आनी ताचेकडेन संबंदीत प्लॉट कोश्टक 1 आनी आकृती 2D,E हातूंत दाखयल्यात. थोडयाच उतरांनी सांगपाचें जाल्यार एल-ओर्निथिनाचें मान्य उतार मोल (y = 2.92x − 4.67) आनी ताचेकडेन संबंदीत आशिल्ली म्हत्वाची आंकडेवारी (Cox & Snell R2 = 0.3709, Nagelkerke R2 = 0.4998 आनी p < 0.0001; आकृती 2D) वेपारी कवकनाशकापरस एस रिझोलेक्स-टी (y = 1.96x − 0.99, कॉक्स आनी स्नेल आर 2 = 0.1242, नागेलकेर्के आर 2 = 0.1708 आनी p < 0.0001) (कोश्टक 1).
कोश्टक 1. एस.
एकंदरीत एस. थोडयाच उतरांनी सांगपाचें जाल्यार उपचार नाशिल्ल्या संसर्गजन्य नियंत्रण वनस्पतींची रोगाची तीव्रता ल्हव ल्हव वाडली (५२.६७ ± १.५३, ८३.२१ ± २.६१, आनी ९२.३३ ± ३.०६%), एल-ओर्निथिनान पुराय प्रयोगांत रोगाची तीव्रता (%) खूब उणी केली (८.९७ ± ०.१५, १८.०० ± उपचारा उपरांत (dpt) अनुक्रमान ७, १४ आनी २१ दिसांनी १.००, आनी २६.३६ ± ३.०७) इतलो आसता (आकृती ३ अ). तेच प्रमाण एस रिझोलेक्स-टी कवकनाशक (१८३.६१ ± ७.७१; आकृती ३ बी). दुसर् या प्रयोगांतय हीच प्रवृत्ती दिसून आयली.
आकृती 3. हरितगृह परिस्थितींत स्क्लेरोटिनिया स्क्लेरोटिओरम ह्या दुयेंसाक लागून जावपी सामान्य कणंगाच्या धव्या कुसपाचेर एल-ओर्निथिनाच्या बाह्यजनन वापराचो परिणाम. (अ) २५० मिग्रॅ/लीटर एल-ओर्निथिन उपचारा उपरांत सामान्य कणंगाच्या धव्या साच्याचो रोगाची वाड वक्र. (B) एल-ओर्निथिन उपचारा उपरांत सामान्य कणंगाच्या धव्या साच्याच्या रोग प्रगती वक्राखाला (AUDPC) वाठार. मोलां पांच जैविक प्रतिकृतींचें सरासरी ± SD दाखयतात (n = 5). वेगवेगळीं अक्षरां उपचारांमदीं सांख्यिकी नदरेन म्हत्वाचे फरक दाखयतात (p < 0.05).
२५० मिग्रॅ/लीटर एल-ओर्निथिन बाह्यजनन वापरल्यार ४२ दिसां उपरांत ल्हव ल्हव वनस्पतीची उंचाय (आकृती ४ अ), दर वनस्पतीक फांट्यांची संख्या (आकृती ४ ब) आनी दर वनस्पतीक पानांची संख्या (आकृती ४ सी) वाडटा. वेपारी कवकनाशक रिझोलेक्स-टी (५० मिग्रॅ/लीटर) ह्या वखदाचो अभ्यास केल्ल्या सगळ्या पोशण मापदंडांचेर चड परिणाम जालो जाल्यार २५० मिग्रॅ/लीटर एल-ओर्निथिन बाह्यजनन वापरल्यार उपचार नाशिल्ल्या नियंत्रणाच्या तुलनेत दुसरो सगळ्यांत चड परिणाम जालो (आकृती ४ अ-क). दुसरे वटेन एल-ओर्निथिन उपचाराचो प्रकाशसंश्लेशण रंगद्रव्य क्लोरोफिल ए (आकृती 4D) आनी क्लोरोफिल बी (आकृती 4E) हांच्या प्रमाणाचेर व्हडलोसो परिणाम जालो ना, पूण नकारात्मक नियंत्रणाच्या (0.44 ± 0.02 मिग्रॅ/ग्रॅम fr wt) आनी वट्ट कॅरोटीनॉयड प्रमाण (0.56 ± 0.03 मिग्रॅ/ग्रॅम fr wt) मात्सो वाडलो आनी सकारात्मक नियंत्रण (०.४६ ± ०.०२ मिग्रॅ/ग्रॅम fr वजन; आकृती ४एफ). एकंदरीत हे परिणाम एल-ओर्निथिन उपचार केल्ल्या फळफळावळीक वनस्पत विखारी नासता आनी तांची वाड लेगीत उत्तेजीत करपाक शकता अशें दिसून येता.
आकृती 4. हरितगृह परिस्थितींत स्क्लेरोटिनिया स्क्लेरोटिओरम ह्या रोगाची लागण जाल्ल्या कणंगाच्या पानांच्या वाडीच्या खाशेलपणांचेर आनी प्रकाशसंश्लेशण रंगद्रव्याचेर बाह्यजनन एल-ऑर्निथिन वापराचो परिणाम. (अ) वनस्पतीची उंचाय (सेंमी), (ब) दर वनस्पतींतल्या फांट्यांची संख्या, (क) दर वनस्पतीक पानांची संख्या, (ड) क्लोरोफिल ए प्रमाण (mg g-1 fr wt), (E) क्लोरोफिल बी प्रमाण (mg g-1 fr wt), (F) एकूण कॅरोटीनॉयड प्रमाण (mg g-1 fr wt). मोलां म्हळ्यार पांच जैविक प्रतिकृतींचें सरासरी ± SD (n = 5). वेगवेगळे अक्षर उपचारांमदीं सांख्यिकी नदरेन म्हत्वाचे फरक दाखयतात (p < 0.05).
प्रतिक्रियाशील ऑक्सिजन जातींच्या (ROS; हायड्रोजन पेरॉक्सायड [H2O2] अशें दर्शयतात) आनी मुक्त कण (सुपरऑक्सायड आयन [O2•−] अशें अभिव्यक्त जातात) हांचे थळाव्या आंतकड्यांच्या रसायनीक स्थानिकीकरणांतल्यान एल-ओर्निथिन (250 मिग्रॅ/लीटर) बाह्यजनन वापरल्यार H2O2 (96.05 ± 5.33 nmol.g−1 FW; आकृती ५ अ) आनी O2•− (३२.६९ ± ८.५६ एनएमओएल.जी−१ एफडब्ल्यू; आकृती ५ ब) हांचे तुळेंत उपचार नाशिल्ल्या संसर्गजन्य वनस्पतींच्या (अनुक्रमान १७३.३१ ± १२.०६ आनी १४९.३५ ± ७.९४ एनएमओएल.जी−१ एफडब्ल्यू) आनी ५० मिग्रॅ/लीटर वेपारी कवकनाशकाचो उपचार केल्ल्या वनस्पतींच्या संचयाचे तुळेंत रिझोलेक्स-टी (अनुक्रमान १७०.१२ ± ९.५० आनी १५७.०० ± ७.८१ एनएमओएल.जी−१ fr wt) ७२ h. hpt खाला H2O2 आनी O2•− हांची उंचेली पातळी जमली (आकृती 5A, B). तेच प्रमाण टीसीए आदारीत मॅलोनडायल्डीहायड (MDA) परीक्षेंत एस. पूण एल-ओर्निथिनाच्या बाह्यजनन वापरांत लिपिड पेरॉक्सायडेशन खूब उणें जालें, हाचो पुरावो उपचार केल्ल्या वनस्पतींनी एमडीएचें प्रमाण उणें जाल्ल्यान (33.08 ± 4.00 nmol.g fr wt) मेळटा.
आकृती 5. हरितगृह परिस्थितींत संसर्ग जाले उपरांत 72 h एस. (A) हायड्रोजन पेरॉक्सायड (H2O2; nmol g−1 FW) 72 hpt, (B) सुपरऑक्सायड अनायन (O2•−; nmol g−1 FW) 72 hpt, (C) मॅलोनडायल्डीहायड (MDA; nmol g−1 FW) 72 hpt, (D) एकूण विरगळपी फिनोल (mg GAE g−1 FW) 72 hpt, (E) ७२ एचपीटीचेर एकूण विद्राव्य फ्लॅव्होनॉयड (mg RE g−1 FW), (F) ७२ hpt च्या वेळार एकूण मुक्त अॅमिनो अॅसिड (mg g−1 FW) आनी (G) प्रोलीन आशिल्लें प्रमाण (mg g−1 FW) ७२ hpt. मोलां 5 जैविक प्रतिकृतींचें (n = 5) सरासरी ± प्रमाण विचलन (सरासरी ± SD) दाखयतात. वेगवेगळे अक्षर उपचारांमदीं सांख्यिकी नदरेन म्हत्वाचे फरक दाखयतात (p < 0.05).